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      如何跑好瓊脂糖凝膠電泳？這3項(xiàng)必備：瓊脂糖、核酸染料、DNA marker
       
      瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂糖作支持介質(zhì)的一種電泳方法，常用于DNA切膠回收，DNA分離和用于佐證DNA是否重組、質(zhì)粒等是否切開(kāi)。
      


       
      


      瓊脂糖凝膠電泳的分析原理與其他支持物電泳最主要區(qū)別是它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。作為分子篩的瓊脂糖凝膠具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，物質(zhì)分子通過(guò)時(shí)會(huì)受到阻力，不同大小的DNA分子帶電情況不同，在電場(chǎng)中受力也不同，因此從負(fù)極向正極遷移的速度不同。大分子物質(zhì)在涌動(dòng)時(shí)受到的阻力大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量，而且還取決于分子大小，這就大大提高了分辨能力。
      


      


       
      


      如何跑好瓊脂糖凝膠電泳？這3項(xiàng)必備：瓊脂糖、核酸染料、DNA marker。
      
 
      


      

      

      

      

      瓊脂糖——雖然我不甜，但還是想要你寵我
      

      

      

      

      


      


      瓊脂糖（Agarose）是純化的線(xiàn)性半乳聚糖親水膠體，提取自瓊脂或者含瓊脂的海藻，結(jié)構(gòu)上是一種線(xiàn)性聚合物，由β-D-吡喃半乳糖（1-4）連接3,6-脫水α-L-吡喃半乳糖基構(gòu)成。
      


       
      


      

      

      

      

      

      瓊脂糖基本參數(shù)
      

      

      

      


      


      
硫酸鹽含量（sulfate content）——純度指標(biāo)；
      


      凝膠強(qiáng)度（gel strength）——施加于凝膠使之?dāng)嗔训耐饬Γ?/span>
      


      膠凝點(diǎn)（Gel point）——水溶性瓊脂糖溶液冷卻后形成凝膠時(shí)的溫度；
      


      電內(nèi)滲（EEO）——液體穿透凝膠的一種電動(dòng)運(yùn)動(dòng)。瓊脂糖凝膠內(nèi)的陰離子基團(tuán)吸附在基質(zhì)上不會(huì)發(fā)生遷移，但是解離的陽(yáng)離子就會(huì)朝負(fù)極遷移，從而產(chǎn)生電滲。由于樣本的電泳遷移通常是朝正極移動(dòng)，因此EEO產(chǎn)生的內(nèi)部對(duì)流會(huì)干擾分離效率。
      
 
      


        
      


       
      


      注：圖示為翌圣瓊脂糖10208ES60產(chǎn)品展示圖。
      

      

      

      


       
      



      
所以，根據(jù)瓊脂糖的基本參數(shù)，優(yōu)質(zhì)的瓊脂糖凝膠應(yīng)該膠孔清晰、膠體不易斷，具備純度高（硫酸鹽含量低）、凝膠強(qiáng)度大、膠凝點(diǎn)相對(duì)高（常溫條件下凝固快）、電內(nèi)滲低等特點(diǎn)。不同大小的目的片段也對(duì)應(yīng)著不同大小的瓊脂糖濃度，根據(jù)高濃度適合分離小片段原則，可參考下表找到合適自己的最佳膠濃度。
      
 
      


      


       
      


       
      


      

      

      

      

      核酸染料——無(wú)毒無(wú)公害，核酸盡顯形
      

      

      

      

      


      瓊脂糖凝膠電泳必然離不開(kāi)核酸染料的加持，溴化乙錠（Ethidium bromide，EB）是應(yīng)用最早的、最成熟的核酸染料，并且由于其價(jià)格便宜、靈敏度高，早期被實(shí)驗(yàn)者廣泛應(yīng)用。但其分子量小，很輕易就能穿透細(xì)胞膜，屬于誘變劑，具有高致癌性，對(duì)人體潛在危害非常大。實(shí)驗(yàn)者使用時(shí)需要謹(jǐn)慎再謹(jǐn)慎，另外，單獨(dú)的EB區(qū)占用了實(shí)驗(yàn)室的大塊空間，廢膠、廢液的處理費(fèi)時(shí)、費(fèi)力又費(fèi)錢(qián)，以及不小心碰到EB區(qū)的東西可能再也不能重見(jiàn)天日了，真是讓人又愛(ài)又恨。
      


       
      


      隨著技術(shù)的發(fā)展，人們對(duì)健康與環(huán)境安全的重視，無(wú)毒核酸染料應(yīng)運(yùn)而生。
      
 
      


      


      那么，市面上宣稱(chēng)的無(wú)毒核酸染料真的無(wú)毒嗎？除了無(wú)毒還有什么優(yōu)勢(shì)呢？ 帶著這些問(wèn)題，可以參考翌圣YeaRed，一款替代EB的安全無(wú)毒核酸染料，來(lái)作為選擇依據(jù)。
      


       
      


      YeaRed是翌圣生物研發(fā)的一種新型無(wú)毒核酸染料，具有獨(dú)特的油性大分子結(jié)構(gòu)，不能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，不易揮發(fā)升華，人體不會(huì)吸入，從而最大程度上保證了實(shí)驗(yàn)者安全。另外，YeaRed核酸染料進(jìn)行了Mini-Ames試驗(yàn)，檢測(cè)結(jié)果為陰性，即在凝膠染色濃度下YeaRed核酸染料無(wú)毒性。（具體檢測(cè)報(bào)告可向我公司技術(shù)咨詢(xún)）
      


       
      


       
      


      

      

      

      

      產(chǎn)品性能測(cè)試
      

      

      

      

      


      


      圖1. 核酸染料YeaRed的瓊脂糖凝膠電泳圖。電泳條件：120 V，30 min。樣品為2000 DNA Marker，1-5上樣量分別為1-5 uL。
      


       
      


       
      


      

      

      

      

      客戶(hù)反饋
      

      

      

      

      


       
      


      ★復(fù)旦大學(xué)
      


      1663749010612929.png
      


      圖2. 核酸染料YeaRed的瓊脂糖凝膠電泳圖。電泳條件：120 V，30 min。Marker：DS2000。目的片段：550 bp。
      
 
      


         ★中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所      
      


      9.png
      


      圖3. 核酸染料YeaRed的瓊脂糖凝膠電泳圖。電泳條件：150 V，30 min。2%瓊脂糖膠。Marker：2000 DNA Marker。目的片段：350 bp。
      
 
      


       
      


      

      

      

      

      DNA Marker——瓊脂糖凝膠電泳標(biāo)尺
      

      

      

      

      


       
      


      DNA Marker是分子量不同的DNA片段的組合，主要用途為DNA分子凝膠電泳時(shí)，與樣品共同加入凝膠中進(jìn)行電泳分離，通過(guò)樣品條帶與DNA Marker對(duì)應(yīng)條帶大小及亮度的對(duì)比，可以粗略估算樣品DNA分子量的大小以及在溶液中的濃度。
      


       
      


      目前翌圣生物DNA Marker分子量大小范圍覆蓋了從50 bp到15 kb的DNA片段，符合絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)需求。
      


       
      


       
      


      

      

      

      

      產(chǎn)品特點(diǎn)
      

      

      

      

      


       
      


      ? 穩(wěn)定性強(qiáng)，可在室溫保存3-6個(gè)月；
      


      ? 背景干凈、帶型穩(wěn)定、大小精準(zhǔn)；
      


      ? 含指示帶，各條帶濃度已知，便于定位及半定量分析；
      


      ? 已含上樣緩沖液，可直接電泳，方便快捷；
      


      ? 附有5×loading buffer，可供樣品加樣使用。
      


       
      


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使用翌圣核酸電泳系列產(chǎn)品已發(fā)表的部分文獻(xiàn)
      


       
      


      滑動(dòng)查看
      


       
      


      

      

      向下滑動(dòng)查看
      

      


      

      

      

       
      


       
      


      [1] Wang Y, Fu Z, Li X, et al. Cytoplasmic DNA sensing by KU complex in aged CD4+ T cell potentiates T cell activation and aging-related autoimmune inflammation. Immunity. 2021;54(4):632-647.e9. doi:10.1016/j.immuni.2021.02.003(IF:31.745)
      


      [2] Yang X, Gao F, Zhang W, et al. "Star" miR-34a and CXCR4 antagonist based nanoplex for binary cooperative migration treatment against metastatic breast cancer. J Control Release. 2020;326:615-627.doi:10.1016/j.jconrel.2020.07.029(IF:7.727)
      


      [3] Qiao Y, Du J, Ge R, et al. A Sample and Detection Microneedle Patch for Psoriasis MicroRNA Biomarker Analysis in Interstitial Fluid. Anal Chem. 2022;94(14):5538-5545. doi:10.1021/acs.analchem.1c04401(IF:6.986)
      


      [4] Lin Q, Ye X, Huang Z, et al. Graphene Oxide-Based Suppression of Nonspecificity in Loop-Mediated Isothermal Amplification Enabling the Sensitive Detection of Cyclooxygenase-2 mRNA in Colorectal Cancer. Anal Chem. 2019;91(24):15694-15702. doi:10.1021/acs.analchem.9b03861(IF:6.350)
      


      [5] Lin Q, Huang Z, Ye X, et al. Lab in a tube: Isolation, extraction, and isothermal amplification detection of exosomal long noncoding RNA of gastric cancer. Talanta. 2021;225:122090. doi:10.1016/j.talanta.2021.122090(IF:6.057)
      


      [6] Wang W, Nie A, Lu Z, Li J, Shu M, Han H. Catalytic hairpin assembly-assisted lateral flow assay for visual determination of microRNA-21 using gold nanoparticles. Mikrochim Acta. 2019;186(9):661. Published 2019 Aug 30. doi:10.1007/s00604-019-3743-8(IF:5.479)
      


      [7] Wang M, Zhang S, Zheng G, et al. Gain-of-Function Mutation of Card14 Leads to Spontaneous Psoriasis-like Skin Inflammation through Enhanced Keratinocyte Response to IL-17A. Immunity. 2018;49(1):66-79.e5.doi:10.1016/j.immuni.2018.05.012(IF:19.734)
      


      [8] Zhang Y, Ding H, Wang X, et al. MK2 promotes Tfcp2l1 degradation via β-TrCP ubiquitin ligase to regulate mouse embryonic stem cell self-renewal. Cell Rep. 2021;37(5):109949. doi:10.1016/j.celrep.2021.109949(IF:9.423)
      


      [9] Zhu Z, Zhang L, Sheng R, Chen J. Microfluidic-Based Cationic Cholesterol Lipid siRNA Delivery Nanosystem: Highly Efficient In Vitro Gene Silencing and the Intracellular Behavior. Int J Mol Sci. 2022;23(7):3999. Published 2022 Apr 3. doi:10.3390/ijms23073999(IF:5.924)
      


      [10] Zhao C, Yang D, Ye Y, et al. Inhibition of Pim-2 kinase by LT-171-861 promotes DNA damage and exhibits enhanced lethal effects with PARP inhibitor in multiple myeloma. Biochem Pharmacol. 2021;190:114648. doi:10.1016/j.bcp.2021.114648(IF:5.858)
      


      [11] Yu J, Yang W, Xing S, et al. Blended gold/MnO2@BSA nanoparticles for fluorometric and magnetic resonance determination of ascorbic acid. Mikrochim Acta. 2019;186(2):89. Published 2019 Jan 10. doi:10.1007/s00604-018-3205-8(IF:5.479)
      


      [12] Zheng X, Xu W, Sun R, Yin H, Dong C, Zeng H. Synergism between thioredoxin reductase inhibitor ethaselen and sodium selenite in inhibiting proliferation and inducing death of human non-small cell lung cancer cells. Chem Biol Interact. 2017;275:74-85. doi:10.1016/j.cbi.2017.07.020(IF:5.194)
      

      

      

      

      


       
      


       
      


      

      

      

      

      相關(guān)產(chǎn)品
      

      

      

      

      


       
      


      
	
		
      
			
			
      產(chǎn)品定位
      
			      		
			
			
      產(chǎn)品名稱(chēng)
      
			      		
			
			
      產(chǎn)品貨號(hào)
      
			      		
			
			
      規(guī)格
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      瓊脂糖
      
			      		
			
			
      Agarose瓊脂糖
      
			      		
			
			
      10208ES60
      
			      		
			
			
      100 g
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      無(wú)毒核酸染料
      
			      		
			
			
      YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water)
      
			      		
			
			
      10202ES76
      
			      		
			
			
      500 μL
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      DNA Marker
      
			      		
			
			
      GoldBand DL2000 DNA Marker
      
			      		
			
			
      10501ES60
      
			      		
			
			
      100 T
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      GoldBand DL5000 DNA Marker
      
			      		
			
			
      10504ES60
      
			      		
			
			
      100 T
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      GoldBand DL10,000 DNA Marker
      
			      		
			
			
      10505ES60
      
			      		
			
			
      100 T
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      GoldBand 100bp DNA Ladder
      
			      		
			
			
      10507ES60
      
			      		
			
			
      100 T
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      GoldBand 1 kb DNA Ladder
      
			      		
			
			
      10510ES60
      
			      		
			
			
      100 T
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      GoldBand Full-Scale DNA Ladder
      
			      		
			
			
      10511ES80
      
			      		
			
			
      1 ml
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      GoldBand DL15000 DNA Marker
      
			      		
			
			
      10512ES60
      
			      		
			
			
      100 T
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      GoldBand 50 bp DNA Ladder
      
			      		
			
			
      10515ES60
      
			      		
			
			
      100 T
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      GoldBand 100 bp plus DNA Ladder
      
			      		
			
			
      10516ES60
      
			      		
			
			
      100 T
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      GoldBand 200 bp DNA Ladder
      
			      		
			
			
      10517ES60
      
			      		
			
			
      100 T
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      GoldBand 500 bp DNA Ladder
      
			      		
			
			
      10518ES60
      
			      		
			
			
      100 T
      
			      		
		
      
	      

      


       
      


       
      

       
       
       
       
       
       
       
      400-6111-883