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      干貨分享|實(shí)用核酸染料小知識
       
      

      凡是要做核酸電泳，就不可避免要接觸核酸染料。小翌在初入實(shí)驗(yàn)室時(shí)，用的就是溴化乙錠（Ethidium Bromide，EB），現(xiàn)在想想真是初生牛犢不怕虎，用的時(shí)候也不太注意，甚至有時(shí)候跑完膠手套都不帶就拿去照膠，全然不把EB毒性放在眼里，還好核酸電泳實(shí)驗(yàn)做的不多，健健康康地畢業(yè)，平平安安地離開了校園。
      


       
      


      那么大家為什么會談EB色變？既然EB有毒，為何還沒有退出科研舞臺？常用的核酸染料有哪些，又該如何選擇？小翌整理了一些關(guān)于核酸染料的內(nèi)容，相信可以幫你做出判斷。
      


      

       
      

      

      


      

      

      

      

      

      強(qiáng)毒型染料--EB
      

      

      

      

      

      


      

      溴化乙錠（EB）是高度靈敏的嵌入性芳香族熒光化合物，是應(yīng)用最早的、最成熟的核酸染料，并且由于其價(jià)格便宜、靈敏度高，早期被實(shí)驗(yàn)者廣泛應(yīng)用。同時(shí)由于其分子量小，很輕易就能穿透細(xì)胞膜，屬于誘變劑，具有高致癌性，對人體潛在危害非常大。EB通常用于分子遺傳學(xué)、DNA和染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析等研究中，特別是國內(nèi)很多實(shí)驗(yàn)室仍在使用EB進(jìn)行核酸凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的染色。溴化乙錠在紫外區(qū)302nm和366nm處有吸收峰，在紫外光的照射下，可被激發(fā)出橙紅色的熒光（590nm）。通常來說，EB與DNA的結(jié)合沒有特異性，大約每2.5個堿基插入一個溴化乙錠分子。正是由于這種特性，使其成為一種核酸染料，結(jié)合有DNA的溴化乙錠復(fù)合物，其熒光強(qiáng)度要比單獨(dú)的EB染料高出20-30倍，因此溴化乙錠可檢測到低至10ng的DNA條帶，非常靈敏。
      


      

       
      

      


      毒性原理：EB是極易滲透細(xì)胞膜與胞內(nèi)DNA嵌合的小分子，它具有平面共軛大環(huán)結(jié)構(gòu)，這種扁平分子可以嵌入核酸雙鏈的配對的堿基之間，與DNA嵌合形成穩(wěn)定的復(fù)合物，從而影響DNA的復(fù)制，破壞正常的遺傳生理現(xiàn)象。EB作為誘變性的化合物，它在人體中誘導(dǎo)突變的機(jī)制是不可逆轉(zhuǎn)的。
      


      

       
      

      


      實(shí)驗(yàn)者使用時(shí)需要謹(jǐn)慎再謹(jǐn)慎，如果只是手接觸了EB污染的東西，用肥皂水洗一下就可以解除危險(xiǎn)，但若是拿取凝膠這樣直接接觸EB的動作，切記一定要帶手套操作。實(shí)驗(yàn)室單獨(dú)的EB區(qū)占用了大塊空間，廢膠、廢液的處理費(fèi)時(shí)、費(fèi)力又費(fèi)錢，而且不小心碰到EB區(qū)的東西可能再也不能重見天日了，可以說EB讓人又愛又恨。
      


      

       
      

      

      


      

      

      

      

      

      劇毒型染料--GoldView
      

      

      

      

      

      


      

      Goldview是一種可替代溴化乙錠（EB）的新型核酸染料，采用瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA 時(shí)，其與DNA發(fā)生結(jié)合并產(chǎn)生很強(qiáng)的熒光信號，靈敏度與EB相當(dāng)，使用方法也完全相同。在紫外透射光下雙鏈DNA呈現(xiàn)綠色熒光，而單鏈DNA呈現(xiàn)紅色熒光。Goldview特別適合大片段（＞1 kb）DNA的檢測，靈敏度高，也可用于RNA的染色。
      


      

       
      

      


      事實(shí)上，Goldview的主要成分就是吖啶橙，是極靈敏的熒光染料，具有細(xì)胞滲透性，可對細(xì)胞中的DNA和RNA同時(shí)染色而顯示不同顏色的熒光。其激發(fā)峰為492nm，熒光發(fā)射峰為 530nm（DNA ）、640nm（RNA），它與雙鏈DNA的結(jié)合方式是嵌入雙鏈之間，而與單鏈DNA和RNA則由靜電吸引堆積在其磷酸根上。
      


      

       
      

      


      Goldview對于大片段DNA的染色效果良好，對于更小片段DNA（特別是＜500bp）的檢測信號可能很弱或者無信號。還有一個很致命的弱點(diǎn)是它的熒光基團(tuán)在紫外燈下非常容易淬滅，一般5-10min條帶就會消失。另外含Goldview的凝膠不適合進(jìn)行膠回收實(shí)驗(yàn)，本底色嚴(yán)重，不穩(wěn)定，在紫外燈下其誘導(dǎo)突變能力極高。
      


      

       
      

      


      總之，Goldview具有細(xì)胞滲透性，有一定的細(xì)胞毒性。建議操作人員使用時(shí)一定做好防護(hù)措施，帶上手套和口罩，并妥善處理好廢棄物。
      


      

       
      

      

      


      

      

      

      

      

      無毒型染料—GelRed/GelGreen
      

      

      

      

      

      


      

      隨著技術(shù)的發(fā)展，人們對健康與環(huán)境安全的重視，無毒核酸染料應(yīng)運(yùn)而生。GelRed/GelGreen是油性大分子產(chǎn)品，不能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，不易揮發(fā)升華，人體不會吸入，經(jīng)過艾姆斯氏和相關(guān)測試表明這兩種染料無明顯誘變性，是集高靈敏、低毒性和超穩(wěn)定于一身的極佳的熒光核酸凝膠染色試劑。同時(shí)其水溶染色劑通過美國環(huán)保局安全認(rèn)定，廢棄物可直接倒入下水道，不會造成任何環(huán)境污染。
      

      


      


      

      GelRed和GelGreen的特殊化學(xué)結(jié)構(gòu)使其難以穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，正是這一特性降低了染料的細(xì)胞毒性。不過也正是因?yàn)槿绱?，其價(jià)格大約是GoldView的十倍左右，是目前市場中最靈敏的凝膠核酸染料之一。而且染料穩(wěn)定性極好，可以使用微波爐加熱，可以在室溫下保存，適用于膠染法（同EB，電泳前染色）和泡染法（電泳后染色）。
      


      

       
      

      


      YeaRed與EB具有相同的光譜特性，無需改變?yōu)V光片及觀察裝置（普通紫外凝膠透射儀），在300 nm處紫外光激發(fā)檢測即可。YeaGreen同SYBR Green I的光譜性質(zhì)，適用于使用471 nm激發(fā)的紫外凝膠成像透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。兩種核酸染料都適用于瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠電泳中的dsDNA、ssDNA以及RNA染色，可選擇膠染法或泡染法進(jìn)行染色，使用非常方便靈活。
      


      

       
      

      


      總之，這些核酸染料各有千秋，出于自身健康和安全考慮，建議大家優(yōu)先選擇無毒染料，做實(shí)驗(yàn)也能多一份安心。不過大家都是在老板手下干活，如果老板覺得只有EB最好用，只讓用有毒的核酸染料，那就只能做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候注意保護(hù)自己嘍！
      


      

       
      

      


      最后，福利放送！感謝你對翌圣的一路支持，翌圣無毒核酸染料大促活動火熱進(jìn)行中，快來看看吧！
      

      


      

      

       
      

      

      


      

      

      

      

      

      產(chǎn)品詳情
      

      

      

      

      

      


      

      
	
		
      
			
			
      產(chǎn)品名稱
      
			      		
			
			
      產(chǎn)品貨號
      
			      		
			
			
      規(guī)格
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water)
      
			      		
			
			
      10202ES76
      
			      		
			
			
      500 μL
      
			      		
		
      
	      

      


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      部分已發(fā)表文獻(xiàn)（使用核酸染料）
      

      

      

      

      

      


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