RNase（Ribonuclease，核糖核酸酶）是一類能夠催化RNA降解為小分子RNA的核酸酶，廣泛存在于真核、原核生物的所有細(xì)胞和組織中，通常有極強活性，RNA樣本中微量的RNase污染足以導(dǎo)致其完全降解。實驗室中RNase污染的主要來源有：

• 實驗中使用的水溶液、反應(yīng)體系的各組分試劑、槍頭等在內(nèi)的實驗耗材；

• 實驗大環(huán)境的污染，RNase 存在于空氣、灰塵和大多數(shù)物體表面；

• 實驗人員的皮膚或唾液等。

所有組織樣品均含有內(nèi)源性RNase。

RNase的無處不在，使得實驗過程中，難以保存RNA樣本的完整性，導(dǎo)致實驗失敗或影響RNA分析的結(jié)果。因此，從源頭上避免RNase污染十分必要，一方面要嚴(yán)格控制外源性RNase的污染，另一方面要最大限度地抑制內(nèi)源性的RNase。

1. 操作人員全副武裝

在實驗過程中戴手套可避免源自人手的RNase污染；觸摸皮膚、門把手及普通物體表面后更換手套；

2. 使用專業(yè)儀器與試劑

RNA操作專用的移液槍；使用RNase-free的槍頭和離心管；使用RNase-free的化合物與試劑；

3. 選擇實驗操作環(huán)境

遠離/遮蔽通風(fēng)孔或開放窗口，走動較少的區(qū)域作為RNase-free區(qū)域；

4. 其他注意的點

在RNA提取和分析期間，不要進行其他可能引起RNase污染的實驗。

1. 樣本保存

組織取樣后若不直接提取RNA，要及時用液氮迅速冷凍存于-80°C環(huán)境，并盡早進行實驗，這樣可使RNA的降解達到最少。

2. 添加抑制劑

在細(xì)胞裂解液中加入RNase抑制劑（RNase inhibitor），使破碎細(xì)胞與滅活RNase同步進行，最大限度地降低細(xì)胞破碎過程中所釋放的RNase的活性。

常見的RNase抑制劑有焦碳酸二乙酯（DEPC）、異硫氰酸胍、氧釩核糖核苷復(fù)合物（RVC）和RNA酶的蛋白質(zhì)抑制劑（RNasin）。其中，DEPC和異硫氰酸胍具有一定的毒性，RVC對PCR聚合酶有抑制作用，不利于展開后續(xù)的實驗。RNA酶的蛋白質(zhì)抑制劑能夠特異地與RNase以非共價鍵結(jié)合形成復(fù)合體，造成RNase失活，因不具有毒性，不影響后續(xù)PCR實驗等優(yōu)勢，常被用來減少RNase的污染。目前，RNasin主要用于cDNA合成，體外轉(zhuǎn)錄，體外翻譯，以及mRNA-protein復(fù)合物分離純化等過程中保護RNA不被降解，還可用于特定RNase活性的鑒定等。

翌圣生物Murine RNase Inhibitor（MRI）是以可溶形式在大腸桿菌中表達純化的重組鼠源RNase抑制劑，能夠廣泛抑制各種類型RNase (RNase A, B, C) 可用于RT-PCR/RT-qPCR，解決體外轉(zhuǎn)錄中RNA降解問題，抑制RNA分離純化過程中RNase的活性。與人源RNase inhibitor相比，Murine RNase Inhibitor不含人源蛋白中的兩個對氧化非常敏感的半胱氨酸，因而具有更高的抗氧化活性，且更加適合于對高DTT敏感性的實驗(如qPCR)。

圖1. Yeasen Murine RNase Inhibitor（MRI, Cat#10603ES）產(chǎn)品圖。

1. 廣譜的RNase抑制活性：可抑制包括RNase A、RNase B、RNase C等在內(nèi)的RNase。

2. 兼容廣泛的反應(yīng)條件：在pH 5.0至9.0條件下和25℃至60℃的溫度下都具有活性，適用于熱穩(wěn)定型逆轉(zhuǎn)錄酶（55℃-60℃）。

3. 兼容廣泛的下游實驗：對SP6、T7或T3 RNA聚合酶，AMV、M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq DNA聚合酶酶活性無影響。

4. 規(guī)?；慨a(chǎn)：單次生產(chǎn)達20億U產(chǎn)能，確保了產(chǎn)品的均一性、穩(wěn)定性和供貨的及時性。

5. 批間穩(wěn)定性：成熟的蛋白表達和純化平臺，符合ISO13485質(zhì)量管理體系，根據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進行質(zhì)控檢測，保證批次間產(chǎn)品的穩(wěn)定性。

1. 無核酸外切酶、切口酶及RNase殘留

圖2. MRI核酸外切酶（20 μl反應(yīng)體系中加入200 U MRI和0.5 μg λDNA-HindⅢ digest，37℃孵育4小時，瓊脂糖凝膠電泳DNA譜帶不發(fā)生變化）、切口酶殘留（20 μl反應(yīng)體系中加入200 U本酶和0.5 μg質(zhì)粒DNA，37℃孵育4小時，瓊脂糖凝膠電泳DNA譜帶不發(fā)生變化）檢測。

注：N代表陰性對照；1、2、3為3組平行實驗。

圖3. 20 μl反應(yīng)體系中加入200 U MRI和0.5 μg 293T RNA，37℃孵育4小時，瓊脂糖凝膠電泳RNA譜帶不發(fā)生變化，則無RNase殘留。

注：N代表陰性對照；1、2、3為3組平行實驗。

2.  RNase抑制能力媲美進口品牌

圖4. 以甲流病毒培養(yǎng)液為模板，使用Hifair® V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)（Cat#13650ES）進行RT-qPCR反應(yīng)，驗證MRI消化RNaseA能力，結(jié)果表明翌圣MRI對RNaseA的抑制能力媲美同類國際競品。

注：Yeasen Control：8 U MRI+0 ng RNaseA；Yeasen：8 U MRI+60 ng RNaseA；R* Control：8 U同類競品+0 ng RNaseA；R*：8 U同類競品+60 ng RNaseA。

1. Murine RNase inhibitor是否會影響RT-PCR和qRT-PCR實驗？

答：不會影響。經(jīng)質(zhì)量測試，每批次Murine RNase inbitior均不含有基因組污染，可適用于RT-PCR和qRT-PCR實驗。

2. 在使用Murine RNase inhibitor配制反應(yīng)體系時，有什么注意事項？

答：配制體系時，在其他可能引入RNase污染來源的組分加入前，RNase inhibitor可首先加入。

3. Murine RNase inhibitor具有核酸內(nèi)切酶及核酸外切酶活性嗎？

答：無核酸內(nèi)切酶及核酸外切酶活性，有助于提高產(chǎn)物得率。