干貨|關(guān)于蛋白Marker的二三事，你都了解嗎？
Q1：蛋白Marker在凝膠上缺失部分條帶？
A： 檢查使用的凝膠類型和百分比。根據(jù)蛋白分子量大小不同，使用不同孔徑的聚丙烯酰胺凝膠。
一般用于蛋白質(zhì)的凝膠選用（29:1）的丙烯酰胺與亞甲基雙丙烯酰胺的混合物，通常12.5%的膠可以將8-180kDa的條帶有效分開，10%的膠8/15/17kDa的條帶會(huì)一起壓縮在前沿，8%的膠10/17/25的條帶會(huì)一起壓縮在前沿。
Q2：預(yù)染蛋白Marker啟用后條帶逐漸消失降解，有時(shí)只剩前沿的很深的藍(lán)色條帶。
A： 產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因是由于實(shí)驗(yàn)操作不當(dāng)或其他，在預(yù)染蛋白Marker中引入了某種外源物質(zhì)導(dǎo)致蛋白Marker特異降解成小片段。
解決方法：1.注意實(shí)驗(yàn)操作習(xí)慣，使用干凈的一次性的取樣槍頭；2.多人使用時(shí)，蛋白marker啟封后立即用干凈的離心管和槍頭分裝。
Q3：蛋白Marker條帶看起來(lái)彌散、模糊，怎么辦？
A： 1.配試劑盡可能使用超純水。
2.選用合適濃度的凝膠并確認(rèn)凝膠在正常有效期內(nèi)。凝膠放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)影響分離效果，建議使用新配制的凝膠電泳。特別注意甲叉丙烯酰胺開封后多次稱取會(huì)很快失效。
3.電壓過(guò)高或電泳時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，產(chǎn)熱過(guò)多導(dǎo)致電泳緩沖液溫度升高。建議參照產(chǎn)品使用說(shuō)明書。
4.電泳緩沖液陳舊，pH值不在緩沖范圍內(nèi)。建議使用新鮮的電泳緩沖液，使用前預(yù)冷緩沖液。
5.存儲(chǔ)或取用不當(dāng)，引入外源污染，導(dǎo)致蛋白降解。建議使用干凈的槍頭和EP管分裝Marker。
Q4：預(yù)染蛋白Marker可以用于非變性凝膠電泳嗎？
A： 不建議將預(yù)染蛋白Marker用于非變性凝膠電泳。因?yàn)樗鼈円呀?jīng)變性（在SDS緩沖液中）和預(yù)還原（通過(guò)專有方法），預(yù)染Marker其標(biāo)示分子量不代表在非變性凝膠電泳中的樣品分子量，但是可以作為一個(gè)電泳相對(duì)標(biāo)尺。
Q5：為什么你們的蛋白Marker跟其他品牌蛋白Marker條帶指示大小不一致？換用不同凝膠，條帶大小變化也不一樣？有時(shí)與目的蛋白的相差也較大？
A： SDS-PAGE中非預(yù)染蛋白Marker受不同緩沖體系的影響小，而預(yù)染蛋白質(zhì)Marker由于多肽鏈上連接的染料集團(tuán)受不同緩沖體系的影響比較大，因此預(yù)染蛋白Marker在使用的不同緩沖體系中，需要用非預(yù)染蛋白marker進(jìn)行標(biāo)定。
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各個(gè)品牌預(yù)染蛋白Marker標(biāo)定采用的非預(yù)染蛋白質(zhì)Marker不一樣。分子量相同的蛋白由于氨基酸殘基序列組成不同，與SDS的結(jié)合有差異，從而顯示出不同的表觀分子量。
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翌圣生物標(biāo)定采用廣泛通用的進(jìn)口品牌非預(yù)染蛋白質(zhì)Marker進(jìn)行標(biāo)定，并且標(biāo)示分子量與標(biāo)定實(shí)測(cè)表觀分子量非常接近(通過(guò)多次和多平行樣測(cè)定）。
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各個(gè)品牌預(yù)染蛋白Marker標(biāo)記采用的染料不一樣，導(dǎo)致在不同緩沖體系中的表觀分子量變化不一樣，有時(shí)差距極大。比如，某進(jìn)口品牌藍(lán)色條帶在Tris-Glycine與Bis-Tris膠中比較，其表觀分子量變化均超過(guò)10%以上，有的條帶變化甚至超過(guò)20%。
翌圣生物預(yù)染蛋白Marker的藍(lán)色和綠色條帶表觀分子量在不同的緩沖體膠中基本無(wú)變化（Tris-Glycine，Bis-Tris，Tris-acetate，Tricine）或變化極?。℉epes-Tris）；紅色條帶跟進(jìn)口品牌變化基本一致，在Bis-Tris，Tris-acetate和部分改良TrisGlycine預(yù)制膠中表觀分子量降低約10%。
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目的蛋白的大小一般為理論分子量（根據(jù)組成氨基酸的數(shù)量計(jì)算出來(lái)的分子量），但由于蛋白質(zhì)和多肽鏈的氨基酸殘基組成和序列不同，結(jié)合SDS的量有差異，因此具有同樣理論分子量的蛋白質(zhì)其表觀分子量常常與理論值有出入，有時(shí)甚至偏差很大。并且有時(shí)目的蛋白可能還存在側(cè)鏈修飾，也會(huì)造成有差異。
所以不能以目的蛋白的理論分子量評(píng)定蛋白Marker的準(zhǔn)確與否。
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產(chǎn)品定位 |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格 |
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寬范圍 |
20350ES72 |
250 μL |
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20350ES76 |
2×250 μL |
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20350ES90 |
10×250 μL |
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寬范圍 |
GoldBand 3-color High Range Protein Marker(10-245 kDa) |
20352ES76 |
2×250 μL |
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20352ES90 |
10×250 μL |
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大分子 |
20347ES72 |
250 μL |
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20347ES76 |
2×250 μL |
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20347ES90 |
10×250 μL |
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小分子 |
20344ES72 |
250 μL |
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20344ES76 |
2×250 μL |
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20344ES90 |
10×250 μL |
