Taq DNA 聚合酶作為分子診斷的核心酶原料,扮演著至關(guān)重要的作用。但隨著應(yīng)用檢測領(lǐng)域的拓展和市場需求的提升,野生型Taq DNA聚合酶的局限性也逐漸凸顯出來,如擴(kuò)增效率低,特異性差,耐抑制能力差等。為此,翌圣ZymeEditor™酶改造平臺針對不同的應(yīng)用需求,全方位定向改造了Taq DNA 酶,目前已獲得一系列品類齊全,性能優(yōu)良的Taq DNA酶系列產(chǎn)品。
UCF.ME®超低殘留
Hieff UCF.ME® Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase (Cat#14314ES)
由于商業(yè)化分子酶主要采用工程菌株(如大腸桿菌等)進(jìn)行重組表達(dá),因此分子酶中會存在一定量的宿主基因組DNA殘留。加上制備環(huán)境和人源等因素影響,分子酶制品中極易存在污染DNA。在病原體檢測過程中,污染的DNA可能會淹沒低豐度的靶標(biāo)核酸或和靶標(biāo)核酸一起被檢出,導(dǎo)致結(jié)果的誤判。Hieff UCF.ME® Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase (Cat#14314ES)是翌圣精心打造的一款UCF.ME®超低殘留的Taq DNA聚合酶,該產(chǎn)品宿主(E. coli)基因組DNA殘留水平極低,可廣泛用于病原微生物檢測等應(yīng)用場景。
快速、全預(yù)混
Hieff UNICON® Hotstart E-Taq DNA Polymerase (Cat#10726ES)
支持引物探針全預(yù)混的qPCR/RT-qPCR Mix的應(yīng)用,可為終端使用客戶省去繁瑣的體系配制過程和降低多次加樣帶來的漏加、錯加風(fēng)險(xiǎn),為客戶創(chuàng)造便捷、省時(shí)、高效率的良好體驗(yàn)。Hieff UCF.ME® Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase (Cat#10726ES)是一款采用公司新一代雙封閉抗體法修飾的熱啟動Taq酶,該Taq酶不僅支持引物探針全預(yù)混,而且與傳統(tǒng)qPCR試劑相比具有更高的靈敏度、特異性以及高GC序列擴(kuò)增能力,同時(shí)還支持快速程序,最快30min即可出結(jié)果。
圖2:以質(zhì)粒DNA為模板,使用10726ES配制成qPCR全預(yù)混液,在37℃下放置14天測試加速穩(wěn)定性。結(jié)果顯示:Ct值和熒光值無顯著變化,表明以10726ES配制的預(yù)混液性能穩(wěn)定。
圖3:以ASFV基因重組質(zhì)粒為模板,使用10726ES配制成的qPCR全預(yù)混液分別使用常規(guī)擴(kuò)增程序和快速擴(kuò)增程序?qū)舛葹? copies/T的模板進(jìn)行20次重復(fù)擴(kuò)增。結(jié)果表明Yeasen 10726ES配制成的qPCR全預(yù)混液最低檢測限可達(dá)5 copies/T,且可兼容常規(guī)擴(kuò)增程序和快速擴(kuò)增程序。
耐抑制
Hieff Unicon® Hotstart Direct Taq DNA Polymerase (Cat#10717ES)
直接PCR的核心是選擇一款高度耐受的聚合酶,可直接對樣本中的核酸分子進(jìn)行PCR擴(kuò)增,省去提取核酸的過程,從時(shí)間、經(jīng)濟(jì)、結(jié)果準(zhǔn)確性多方面提高檢測效率。翌圣生物研發(fā)的Hieff Unicon® Hotstart Direct Taq DNA Polymerase (Cat#10717ES)是一款優(yōu)秀的耐受抑制熱啟動Taq酶,可用于開發(fā)針對不同樣品如咽拭子、全血、糞便、痰液等PCR產(chǎn)品,助力快速檢測。
圖4:使用10717ES配制成qPCR mix,測試該qPCR mix及各品牌同類型試劑在不同血液雜質(zhì)背景中的耐受能力表現(xiàn),結(jié)果顯示10717ES配制成的qPCR mix對于EDTA、檸檬酸鈉、0.5%全血有更高的耐受性。
多重
Hieff Unicon® Hotstart J-Taq DNA polymerase (Cat#10723ES)
tNGS技術(shù)將超多重PCR與高通量測序技術(shù)相結(jié)合,可同時(shí)檢測樣本中幾十至幾百種常見病原微生物及其耐藥基因,在提高靈敏度的同時(shí),可降低測序數(shù)據(jù)量,實(shí)現(xiàn)成本及性能的雙重優(yōu)化。Hieff Unicon® Hotstart J-Taq DNA polymerase (Cat#10723ES)是一款擴(kuò)增產(chǎn)量高、持續(xù)合成能力強(qiáng)的熱啟動Taq酶,可用于超多重PCR擴(kuò)增。
圖5:使用Yeasen 10723ES配制成多重PCR預(yù)混液,用于片段長度100-250 bp的1000重病原panel的擴(kuò)增。結(jié)果顯示:擴(kuò)增效率高、擴(kuò)增均一性較好,病原檢出和競品相當(dāng)。
甲基化
Hieff UNICON® HotStart High Tolerant Taq DNA Polymerase (Cat#14317ES)
甲基化與許多疾病有密切的聯(lián)系,因此對甲基化程度的檢測可以很好地對疾病進(jìn)行診斷。DNA經(jīng)重亞硫酸鹽處理后,甲基化的胞嘧啶不變,未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏?,利用這一特征進(jìn)行引物探針設(shè)計(jì),可搭建qPCR檢測體系實(shí)現(xiàn)對甲基化的監(jiān)測。Hieff UNICON® HotStart High Tolerant Taq DNA Polymerase (Cat#14317ES)是一款適用于重亞硫酸鹽處理模板的熱啟動Taq酶,可用于搭建PCR體系用于甲基化樣本的檢測。
圖6:使用Yeasen 14317ES配制成PCR預(yù)混液,用于重亞硫酸氫鹽處理過的模板的擴(kuò)增。結(jié)果顯示:14317ES擴(kuò)增效果優(yōu)于T*同類產(chǎn)品。
SNP分型
Hieff UNICON® HotStart Super Specific Taq DNA Polymerase (Cat#14318ES)
SNP是人類可遺傳的變異中最常見的一種,占所有已知多態(tài)性的90%以上,已成為人們研究各類疾病相關(guān)基因、藥物設(shè)計(jì)和測試以及生物學(xué)基礎(chǔ)研究的強(qiáng)有力工具。Hieff UNICON® HotStart Super Specific Taq DNA Polymerase (Cat#14318ES)是一款自主研制的抗體進(jìn)行封閉的高特異熱啟動DNA聚合酶,適用于ARMS-PCR和Taqman-MGB探針法等高特異性PCR擴(kuò)增場景。
高特異性:適用于SNP基因分型,效果與T*同類產(chǎn)品相當(dāng)
圖7:使用Yeasen 14318ES配制成Arms-PCR預(yù)混液,用于含0.05%突變模板和100%野生型模板擴(kuò)增,結(jié)果顯示:預(yù)混液能有效檢出含0.05%突變模板,且對野生型模板無擴(kuò)增。
可凍干
卓越的凍干性能:50℃加速25天,凍干品加速前后Ct值和熒光值均無顯著變化
圖8:使用Yeasen 13705ES配制成RT-qPCR預(yù)混液,同時(shí)擴(kuò)增105、104、103copies/mL 的新冠假病毒模板,進(jìn)行凍干球50℃加速25天穩(wěn)定性測試。結(jié)果顯示:凍干品加速前后Ct值和熒光值均無顯著變化,凍干產(chǎn)品穩(wěn)定性良好。
ZymeEditor™平臺其他相關(guān)分子酶原料清單
翌圣ZymeEditor™酶改造定制服務(wù)
翌圣ZymeEditor™是一個(gè)酶改造底層技術(shù)平臺,它基于翌圣生物多年在分子酶改造領(lǐng)域中的技術(shù)積累與知識拓展,該平臺已具備對多種酶的多種需求進(jìn)行定向改造的能力。因此,ZymeEditor™平臺從2023年開始正式推出酶改造對外定制服務(wù),可為各種應(yīng)用領(lǐng)域(如醫(yī)藥、診斷、食品、化工等)的客戶提供全套酶改造服務(wù),也可以單獨(dú)提供蛋白發(fā)酵及純化工藝開發(fā)優(yōu)化、規(guī)模化生產(chǎn)服務(wù),以滿足不同客戶的需求,助力產(chǎn)業(yè)升級。
圖9.ZymeEditor™酶改造定制服務(wù)流程