圖1.DNA和RNA的結(jié)構(gòu)

人體一個(gè)細(xì)胞含RNA約10pg（含DNA約7pg）。在細(xì)胞中，根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同，RNA主要分三類，即tRNA（轉(zhuǎn)運(yùn)RNA），rRNA（核糖體RNA），mRNA（信使RNA）。mRNA含量低，占細(xì)胞總RNA的1%~5%。核糖體RNA特點(diǎn)含量高，占細(xì)胞總RNA的80%~85%。

表1：RNA的結(jié)構(gòu)和功能

隨著高通量組學(xué)技術(shù)的應(yīng)用，在高等哺乳動(dòng)物中已發(fā)現(xiàn)高達(dá)數(shù)十萬種非編碼RNA，根據(jù)結(jié)構(gòu)與功能可對(duì)其進(jìn)行科學(xué)分類和系統(tǒng)命名，如tRNA、rRNA、snRNA、snoRNA、siRNA、miRNA、piRNA和lncRNA等。非編碼RNA是當(dāng)今生命科學(xué)發(fā)展最為迅速的前沿領(lǐng)域之一，它不斷更新人們對(duì)生命本質(zhì)的認(rèn)識(shí)，為生物遺傳育種及人類重大疾病的干預(yù)、防治和藥物研究等提供全新的思路與技術(shù)(Amaral et al，2008)。

圖2.非編碼RNA的生物學(xué)功能（Cell. 2019 Nov 14; 179(5): 1033–1055.）

RNA研究的第一步為RNA提取，高質(zhì)量的RNA是進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、RT-PCR等試驗(yàn)的基礎(chǔ)，然而由于RNA單鏈結(jié)構(gòu)的不穩(wěn)定性和無處不在的RNA酶，使得RNA在提取過程中容易發(fā)生降解，同時(shí)，傳統(tǒng)的RNA提取方法毒性大，因此，提取出高質(zhì)量的RNA，選擇合適的提取產(chǎn)品非常重要！

對(duì)于常規(guī)的新鮮或凍存的組織、貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞RNA提取，我們首推MolPure® Cell/Tissue Total RNA Kit  細(xì)胞/組織總RNA提取試劑盒19221ES，適用于10-20 mg動(dòng)物組織或(1-5)×10⁶個(gè)動(dòng)物細(xì)胞的總RNA提取純化。

取10⁶個(gè)雜交瘤細(xì)胞，分別使用19221和TRIzol（貨號(hào)：10606ES）提取總RNA。之后測(cè)定濃度和瓊脂糖凝膠電泳；同時(shí)取2 μL，使用Hifair^® Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit（貨號(hào)：11143ES）進(jìn)行定量測(cè)試小鼠GAPDH。結(jié)果顯示，MolPure^® Cell/Tissue RNA Kit能穩(wěn)定提取RNA，RNA產(chǎn)量高，完整度較好。

圖 2.RNA 質(zhì)量和濃度

圖3.一步法反轉(zhuǎn)錄定量結(jié)果 （注：綠色為 19221，藍(lán)色為 Trizol）

老師們可能會(huì)疑問為什么不首推Trizol或Trizol相關(guān)的產(chǎn)品呢？因?yàn)門RIzol有它固有的缺點(diǎn)：

如果老師們從成本的角度考慮，我們也有性能優(yōu)異的Trizol提取產(chǎn)品。

MolPure^® TRIeasy Plus Total RNA Kit總 RNA 提取試劑盒（帶離心柱）19211ES是利用MolPure^® RNA Column A1和改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法（TRIzol法）來提取樣品中的總RNA，適用于TRIzol法所能提取的所有樣本，包括各種動(dòng)植物、細(xì)菌和細(xì)胞樣品。該試劑盒方便快捷，1 h完成可完成操作，且不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過程。

圖 4.RNA 質(zhì)量和濃度