RNase HII是一種核糖核酸內(nèi)切酶，識(shí)別并切割嵌入DNA雙鏈中的單個(gè)核糖核昔酸5端位點(diǎn)的磷酸二醋鍵，切割后產(chǎn)生一個(gè) 5′ 端磷酸基團(tuán)和一個(gè) 3′ 端羥基（圖1）。但RNase HII對(duì)單鏈RNA切割活性極低，對(duì)dsDNA、ssDNA無切割活性。RNase HII在50°C~75°C間具有活性，在70~75°C具有最佳活性。由于RNase HII具有在DNA摻入單個(gè)核糖核苷酸位點(diǎn)處進(jìn)行單點(diǎn)切割而對(duì)dsDNA、ssDNA無切割活性的特性，RNase HII常用于啟動(dòng)反應(yīng)（引物激活并延伸）的“開關(guān)”，從而實(shí)現(xiàn)特異性擴(kuò)增，在RNase HII依賴性PCR(rhPCR)、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP)、岡崎片段（Okazaki fragment）部分RNA降解等應(yīng)用廣泛。

rhPCR即依賴于RNase HII的PCR，在PCR的基礎(chǔ)上增加了RNase HII和封閉式可切割rhPCR引物。

rhPCR利用了RNase HII的特殊性質(zhì)，即可以特異性地水解DNA-RNA雜合鏈中的RNA，但不能水解單鏈或雙鏈DNA或RNA中的磷酸二酯鍵，不能消化單鏈或雙鏈DNA或RNA。因此只有當(dāng)互補(bǔ)靶DNA堿基存在時(shí)，RNase HII才能消化DNA-RNA雜交鏈從而允許引物延伸。由于僅在與互補(bǔ)靶序列緊密結(jié)合時(shí)才發(fā)生rhPCR引物的裂解切割，故極大地提高了反應(yīng)的準(zhǔn)確性。RNase HII是唯一能夠通過水解核糖核酸5' 端的磷酸二酯鍵來啟動(dòng)無突變?nèi)コ颂呛塑账徇^程的酶。rhPCR因其特異性、靈敏度和重復(fù)性，在單核苷酸多態(tài)性（SNP）、基因分型、多靶標(biāo)同時(shí)檢測(cè)、環(huán)境核酸檢測(cè)等方面具有一定的優(yōu)勢(shì)。（戳連接，了解詳情）

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP)是一種簡(jiǎn)便、快速的基因擴(kuò)增方法，能在等溫條件下，短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行核酸擴(kuò)增。但由于在常溫配制過程中，DNA聚合酶已經(jīng)開始工作，形成非特異性的錯(cuò)配，容易產(chǎn)生少量錯(cuò)配和引物二聚體，這些輕微的污染都會(huì)造成假陽性。

將RNase HII應(yīng)用于LAMP擴(kuò)增體系后，能有效解決LAMP技術(shù)的假陽性問題，為L(zhǎng)AMP技術(shù)更加廣泛的應(yīng)用于臨床診斷。如圖3所示，利用Rnase HII引物激活的LAMP方法(PA-LAMP)，當(dāng)引物與靶ssDNA配對(duì)時(shí)，Rnase HII酶特異性切割引物上的RNA，激活引物，從而允許引物延伸，實(shí)現(xiàn)特異性擴(kuò)增，有效減少體系中的假陽性。

翌圣的RNase HⅡ（Cat#14539）來源于深淵熱球菌 (Pyrococcus abyssi, P.a.)，無核酸外切酶、切口酶、RNase殘留，低宿主殘留，有效減少體系假陽性。翌圣RNase HⅡ極度耐熱，95°C反應(yīng)30 min后，仍保持活性，可與rhPCR各反應(yīng)體系兼容，也適用于LAMP等。

圖6. 核酸外切酶、切口酶、RNase殘留檢測(cè)結(jié)果