在細菌表面可分泌表達特殊功能蛋白與免疫球蛋白特異結(jié)合,主要分為Protein A金黃色葡萄球菌蛋白 A(Staphylococcal proteinA, SPA)、Protein G鏈球菌G群的細胞表面蛋白 G(Streptococcal protein G, SPG)和Protein L大消化鏈球菌蛋白 L(Peptostreptococcus protein L, PPL),均為典型的免疫球蛋白結(jié)合蛋白??山Y(jié)合大多數(shù)哺乳動物的免疫球蛋白,其結(jié)合方式和結(jié)合譜有所差異,三種蛋白可以優(yōu)勢互補,靈活應用。
新產(chǎn)品借助天然蛋白結(jié)構(gòu)域分析,特異設計與之對應的重組蛋白產(chǎn)品,具有高純度,低內(nèi)毒素以及無外源引入IgG等特點,使之在免疫學相關研究與生產(chǎn)中發(fā)揮巨大作用。
圖1. Yeasen 的Protein系列重組蛋白
作為應用較為廣泛的親和配基使用,研究工作者分別解析其區(qū)域結(jié)合域,具體如下:
重組蛋白Protein A由大腸桿菌表達體系獲得,功能與SPA 基本相同,由5個 IgG 結(jié)合結(jié)構(gòu)域 E-D-A-B-C 串聯(lián)排列組成,對 IgG 的 Fc 片段具有很強的特異性親和力。重組蛋白Protein A 作為親和配基被偶聯(lián)到基質(zhì)上,可以特異性的和樣品中的抗體分子結(jié)合,而使其他雜蛋白流穿,具有極高的選擇性。
重組蛋白Protein G從大腸桿菌表達體系中獲得,含有SPG 的 3 個 IgG 結(jié)合區(qū)。為確保 IgG 的最大特異性結(jié)合,重組蛋白Protein G 中細胞壁結(jié)合區(qū)、細胞膜結(jié)合區(qū)和白蛋白結(jié)合區(qū)已被去除,減少了交叉反應和非特異性結(jié)合。重組蛋白Protein G 被廣泛與樹脂偶聯(lián)的配體,用作純化多克隆或單克隆 IgG 抗體。
重組蛋白Protein L 類似于PPL包含 5 個 kappa 結(jié)合結(jié)構(gòu)域。具有獨特的通過 kappa 輕鏈相互作用結(jié)合而不干擾抗體-抗原結(jié)合位點。重組蛋白 Protein L 中去除了細胞壁結(jié)合區(qū)、細胞膜結(jié)合區(qū)和白蛋白結(jié)合區(qū),以確保最大程度 IgG 的特異性結(jié)合。
重組蛋白Protein A/G在大腸桿菌中產(chǎn)生,由 7 個 IgG 結(jié)合結(jié)構(gòu)域 EDABC-C1C3 組成,對應于 5 個Protein A 的 IgG 結(jié)合區(qū)和 2 個Protein G 的 IgG 結(jié)構(gòu)域。重組蛋白Protein A/G 的結(jié)合能力比單獨的蛋白 A 或蛋白 G 更廣。
1. 作為純化配基,親和層析介質(zhì)制備原料;
2. 作為抗原,應用于生產(chǎn)高質(zhì)量抗體;
表1. Protein A、G 和 L 對不同物種 Ig 的結(jié)合能力總表
1. 低內(nèi)毒素:經(jīng)LAL法檢測,均< 0.1EU/μg。
2. 高純度:均>96%,經(jīng)SDS-PAGE和HPLC雙重檢測。
3. 產(chǎn)品形態(tài):凍干粉,相比于液體,凍干粉產(chǎn)品穩(wěn)定性更好,更易長時間儲存。
5. 現(xiàn)貨供應,多種規(guī)格可選。
產(chǎn)品質(zhì)檢數(shù)據(jù)
圖5. Protein A蛋白質(zhì)控數(shù)據(jù)
重組蛋白Protein A 經(jīng) SDS-PAGE 和 HPLC 雙重檢測,純度>97%
圖6. Protein G蛋白質(zhì)控數(shù)據(jù)
重組蛋白Protein G 經(jīng) SDS-PAGE 和 HPLC 雙重檢測,純度>96%
圖7. Protein L蛋白質(zhì)控數(shù)據(jù)
重組蛋白Protein L 經(jīng) SDS-PAGE 和 HPLC 雙重檢測,純度>97%
圖8. Protein A/G蛋白質(zhì)控數(shù)據(jù)
重組蛋白Protein A/G 經(jīng) SDS-PAGE 和 HPLC 雙重檢測,純度>97%