PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶鏈式反應,是指在DNA聚合酶催化下,以母鏈DNA為模板,以特定引物為延伸起點,體系中加入dNTP、Mg2+以及延伸因子、擴增增強因子,通過變性、退火、延伸等步驟,體外復制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程,能快速特異地在體外擴增任何目的DNA。
圖1. 聚合酶鏈式反應
一般來說,每一次PCR反應都要經(jīng)過變性、退火以及延伸,各階段所需時間各不相同,而延伸時間的長短直接決定了PCR的擴增速率。翌圣匠人通過不斷創(chuàng)新,一代又一代的產(chǎn)品更迭,終于研發(fā)出了一款集快速、應用范圍廣于一體的全能快速PCR Mix(Cat#10157)。
1. 擴增速度快&檢出率高
圖2. 以人源基因組為模板,分別擴增長度為1, 2, 3, 4, 8 kb的目的片段。PCR反應條件使用本公司推薦的PCR反應條件。反應結(jié)束后,取4μl進行電泳=檢測。Marker:15000bp DNA 。
2. 穩(wěn)定性強&GC含量兼容性高
圖3. 10157ES03置于37℃分別進行0d,7d,14d的產(chǎn)品穩(wěn)定性測試,模板GC含量為30-70%。結(jié)果可以看出37℃放置14天產(chǎn)品性能依然穩(wěn)定,且GC兼容性很強。M: 15000 DNA Marker
3. 靈敏度高
圖4. 以8 kb人gDNA為模板進行基因組DNA擴增靈敏度測試。
4. 酵母簡單裂解直擴
圖5. 以簡單裂解的酵母水溶液為模板進行擴增測試。條件:水煮5min后,取20μL酵母水溶液加入50μL體系中。
圖6. 模板未經(jīng)純化,目的片段GC含量58.8%大小1034bp,樣本來源為鼠尾(來自北京大學深圳研究生院)。
Q:PCR Mix擴增產(chǎn)物類型?
A:3'-A產(chǎn)物。可用于TA克隆。
Q: PCR Mix有沒有3'-5的外切酶活性?
A:沒有。
Q:PCR Mix校正因子矯正的是Taq酶嗎?是什么成分?延長因子是什么?
A:校正因子校正的是錯配堿基,它是一類具有校正活性的酶,延伸因子是幫助合成長片段的,是一個輔助蛋白。
Q:PCR Mix是否含SDS和溴酚藍?
A:不含SDS,含溴酚藍。
Q: 10157鎂離子濃度,dNTP中濃度分別是多少?
A:鎂離子終濃度1.5mM,dNTP 0.3mM。
Q:PCR mix 保質(zhì)期多久?
A:-20℃,有效期2年。
Q: PCR mix穩(wěn)定性測試結(jié)果?
A:反復凍融100次,37C放置14天,依然穩(wěn)定。
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產(chǎn)品定位 |
產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
普通PCR |
10102ES03 |
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快速PCR |
10157ES03 |
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52×高保真酶,30%-70%GC兼容 |
10153ES60 |
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52×高保真mix,30%-70%GC兼容 |
10154ES03 |
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83×高保真酶,30%-70%GC兼容 |
10148ES60 |
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83×高保真mix,30%-70%GC兼容 |
10149ES03 |
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5s/kb,超快速高保真mix,保真???/span> |
2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix |
10163ES03 |
2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye) |
10164ES03 |
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