產(chǎn)品描述

D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是體內(nèi)活體成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后，導(dǎo)入研究動物如大、小鼠體內(nèi)，之后注入熒光素，通過生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來檢測光強(qiáng)度變化，從而實時監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的治療功效等。也可以利用ATP對此反應(yīng)體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征。

  

D-熒光素也常用于體外研究，包括熒光素酶和ATP水平分析、報告基因分析、高通量測序和各種污染檢測。目前市場上有三種產(chǎn)品形式，D-熒光素（游離酸），D-熒光素鈉鹽，以及D-熒光素鉀鹽。這三種產(chǎn)品主要的差別在于溶解特性上。D-熒光素（游離酸）水溶性以及緩沖體系的溶解性都很弱，除非溶于弱堿如NaOH和KOH溶液。鈉鹽和鉀鹽形式的D-熒光素能夠非常容易且快速的溶入水或者緩沖液中，使用方便，溶劑無毒性，特別適合體內(nèi)實驗。配成液體后的這三種產(chǎn)品，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實質(zhì)性的差別。

 

產(chǎn)品性質(zhì)

中文別名（Chinese synonym）	D-螢火蟲熒光素游離酸；
英文別名（English synonym）	S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid; D-Luciferin Firefly, free acid
CAS號（CAS NO.）	2591-17-5
分子式（Formula）	C11H8N2O3S2
分子量（Molecular weight）	280.33 g/mol
外觀（Appearance）	類白色至淺黃色粉末
溶解性（Solubility）	本品難溶于水，可加入稀堿促進(jìn)其溶解。
純度（Purity）（HPLC）	≥95%

 

運輸和保存方法

冰袋運輸；-20℃干燥避光保存；有效期一年。

 

使用方法

1 體外生物發(fā)光檢測

1）用稀堿（如NaOH，KOH溶液）溶解D-熒光素，游離酸，配制成30 mg/mL的儲存液（200×），并調(diào)整pH至7.4?；靹?/span>

 

后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存，避免反復(fù)凍融。

【注】：如果有沉淀發(fā)生則需要調(diào)整pH至更高直至完全溶解。之后可以重新用酸性溶液來中和，調(diào)整至pH7.4。

2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基1:200稀釋儲存液，配制工作液（終濃度150 µg/mL）。

3）去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基直至無殘留。

4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析（或者細(xì)胞放在37℃短時間孵育后檢測可增強(qiáng)信號）。

2 活體成像分析

1）用稀堿（如NaOH，KOH溶液）配制D-熒光素工作液（15 mg/mL），并調(diào)節(jié)pH至7.4，0.2µm 濾膜過濾除菌?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b于-20℃或-80℃凍存，避免反復(fù)凍融。一旦使用，放到4℃解凍，保持冰冷且避光。

2）注射量取決于注射方式，具體如下：

注射方式	劑量
靜脈注射（25-27gauge 針頭）	按 10 µL/g 體重濃度，加入相應(yīng)體積的 15 mg/mL 熒光素工作液
腹腔注射（25-27gauge 針頭）	按 10 µL/g 體重濃度，加入相應(yīng)體積的 15 mg/mL 熒光素工作液
肌肉注射（27gauge 針頭）	50 µL，濃度為1-2 mg/mL 熒光素工作液
鼻內(nèi)注射（pipette）	50 µL，濃度為3 mg/mL 熒光素工作液

3）注射入體內(nèi)10-20 min（待光信號達(dá)到最強(qiáng)穩(wěn)定平臺期），再進(jìn)行成像分析。

【注】：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線，從而確定最高信號檢測時間和信號平臺期。

 

注意事項

1）本品（firefly luciferin）和甲蟲熒光素（beetle luciferin）都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-

carboxylic acid，僅僅是不同公司在命名上的差異。

2）本品保存和操作的過程中都要避光。另外儲存液過濾除菌后，可以-20℃或-80℃分裝凍存，避免反復(fù)凍融。如果有條件，對儲存液充氮氣或氬氣（防止氧化），穩(wěn)定性和保存時間更長，長達(dá)1年。

3）注射方式，動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射，因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學(xué)曲線，確定最佳信號平臺期和最佳的檢測時間。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

5）本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

HB220209