白細胞介素-7(IL-7)是一種25 kDa的造血家族細胞因子,在淋巴細胞分化、增殖和存活中發(fā)揮重要作用。人IL-7與小鼠、大鼠、犬和貓IL-7具有約60-63%的氨基酸序列同一性,人和小鼠IL-7表現(xiàn)出跨物種活性。IL-7由淋巴組織中的多種細胞產(chǎn)生,包括胸腺、骨髓和腸道的基質(zhì)上皮細胞。IL-7及其受體IL-7R已用于各種免疫治療應用,也常用于液體腫瘤和某些實體腫瘤模型,使用IL-7治療的毒性或副作用較輕。
翌圣Human IL-7 ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒,用于定量測定血清、血漿中的人白介素7(Human IL-7)。特異性抗人白介素7抗體預包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本,經(jīng)過孵育,樣本中存在的人白介素7與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后,加入檢測抗體孵育結(jié)合,經(jīng)洗滌,再加入酶結(jié)合物(Streptavidin-HRP)孵育結(jié)合。洗滌后,加入顯色底物 TMB,避光顯色。顏色反應的深淺與樣本中人白介素7的濃度成正比。加入終止液終止反應,在450 nm 波長(參考波長570 - 630 nm)測定吸光度值。
貨號 |
97069ES48 / 97069ES96 |
規(guī)格 |
48 T / 96 T |
檢測范圍 |
7.81-500 pg/mL |
檢測方法 |
雙抗夾心法 |
檢測物種 |
人 |
檢測時長 |
4.5小時 |
靈敏度 |
4.42 pg/mL |
稀釋線性 |
87 - 124% |
回收率 |
79 - 123% |
板內(nèi)差 |
3.9% |
板間差 |
4.4% |
數(shù)據(jù)擬合繪制標準曲線,生成的標曲用于實驗數(shù)據(jù)分析。
標準曲線圖
濃度(pg/mL) |
顯色值 |
平均值 |
校準值 |
|
500 |
2.257 |
2.262 |
2.259 |
2.265 |
250 |
1.594 |
1.584 |
1.589 |
1.571 |
125 |
0.933 |
0.947 |
0.940 |
0.958 |
62.5 |
0.539 |
0.522 |
0.530 |
0.538 |
31.25 |
0.311 |
0.309 |
0.310 |
0.297 |
15.63 |
0.189 |
0.172 |
0.181 |
0.172 |
7.81 |
0.115 |
0.121 |
0.118 |
0.112 |
0 |
0.044 |
0.042 |
0.043 |
/ |
IL-7的最低檢測限為4.42 pg/mL,通過使用重復檢測20次零孔OD值的均值與標準差計算得出。
酶標板內(nèi)精密度
3個已知濃度的樣本酶標板內(nèi)重復測定8次,評估酶標板內(nèi)的精密度。
酶標板間精密度
3個已知濃度的樣本酶標板間重復檢測22次,評估酶標板間的精密度。
項目 |
板內(nèi)精密度 |
板間精密度 |
||||
樣本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
8 |
8 |
8 |
22 |
22 |
22 |
|
平均值 |
234.10 |
55.81 |
13.64 |
230.25 |
55.96 |
13.49 |
標準差 |
8.22 |
1.86 |
0.65 |
9.10 |
2.18 |
0.70 |
變異系數(shù)(%) |
3.5 |
3.3 |
4.8 |
4.0 |
3.9 |
5.2 |
通過不同水平的IL-7添加于樣本中來測定回收率,其回收率如下:
樣本類型 |
平均回收率(%) |
范圍(%) |
血清 |
94.6 |
79.2-104.7 |
血漿 |
88.7 |
79.6-106.6 |
113.9 |
102.8-123.1 |
血清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍(%) |
1:02 |
106.2 |
98.1-111.6 |
1:04 |
107.1 |
98.8-115.2 |
1:08 |
118.6 |
114.8-124.1 |
1:16 |
96.2 |
93.2-100.1 |
血漿稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍(%) |
1:02 |
95.9 |
87.1-105.8 |
1:04 |
103.4 |
101.3-105.4 |
1:08 |
112.7 |
101.2-121.0 |
1:16 |
112.8 |
96.0-126.0 |
細胞培養(yǎng)上清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍(%) |
1:02 |
92.2 |
87.3-97.8 |
1:04 |
103.2 |
96.5-108.1 |
1:08 |
97.9 |
88.5-104.7 |
1:16 |
95.8 |
93.6-97.9 |
應用本試劑盒,檢測若干健康志愿者的樣本,志愿者的用藥史不詳。
樣本類型 |
樣本數(shù)目 |
平均值(pg/mL) |
樣本值(pg/mL) |
血清 |
12 |
n.d. |
n.d. |
血漿 |
8 |
n.d. |
n.d. |
細胞培養(yǎng)上清 |
4 |
n.d. |
n.d. |
n.d. 指樣本濃度值低于檢測范圍內(nèi)得7.8 pg/mL
本試劑盒識別天然和重組人白介素7。下述因子進行了特異性的評估,沒有觀察到明顯的交叉反應和干擾影響。
Recombinant human: |
Recombinant Mouse: |
||
IL-1α |
IL-7Ra |
IL-1α |
IL-10 |
IL-1β |
IL-8 |
IL-1β |
IL-12 |
IL-2 |
IL-9 |
IL-2 |
|
IL-3 |
IL-10 |
IL-3 |
|
IL-4 |
IL-11 |
IL-4 |
|
IL-5 |
IL-12 |
IL-6 |
|
IL-6 |
|
IL-7 |
|
檢測簡圖
問題 |
造成原因 |
解決方法 |
標曲不好 |
移液量不準確 |
檢查移液器,按時校準,仔細操作,充分混勻時蓋緊管口并盡量避免泡沫。 |
稀釋方法不恰當 |
||
顯色值偏低 |
孵育時間太短 |
給予足夠的孵育時間,樣本和溶解的標準品隔夜后更換。 |
移液量不足或稀釋不當 |
校準移液器和規(guī)范操作 |
|
CV偏高 |
酶標板清洗不當 |
使用正確的洗滌工序;如果使用洗板機,檢查所有的端口是否堵塞。 |
受污染的洗液 |
準備新鮮洗液 |
|
靈敏度較低 |
試劑盒儲存不當 |
按照產(chǎn)品組分表進行保存。 |