產(chǎn)品信息

背景描述

腔腸素（Coelenterazine）是自然界中資源最豐富的天然熒光素，是絕大多數(shù)海洋發(fā)光生物（超過75%）的光能貯存分子。腔腸素可作為許多熒光素酶的底物，比如海腎熒光素酶（Rluc），Gaussia分泌型熒光素酶（Gluc），以及包括水母發(fā)光蛋白（aequorin）和藪枝螅發(fā)光蛋白（Obelia）在內(nèi)的光蛋白（Photoproteins）。其發(fā)光原理是：以腔腸素為底物的熒光素酶在有分子氧的條件下，氧化腔腸素，產(chǎn)生高能量的中間產(chǎn)物，并在此過程中發(fā)射藍色光，峰值發(fā)射波長約為450~480 nm。

腔腸素作為水母發(fā)光蛋白復合物（Aequorin）的組成成分，只有與鈣離子（Ca2+）結合后，才能被氧化生成高能量產(chǎn)物Coelenteramide，同時釋放出CO2和藍色熒光（~466 nm）。其具有以下幾個優(yōu)點：1）能檢測較大范圍的Ca2+濃度（0.1-100 μM）；2）樣品無自體熒光，背景熒光較低，盡管信號較熒光鈣離子指示劑弱，但信噪比更高，因此具有較高靈敏度；3）Aequorin能夠穩(wěn)定維持在細胞內(nèi)，能夠進行數(shù)小時至數(shù)天Ca2+的監(jiān)測。

腔腸素具有能量轉(zhuǎn)移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET）的特性：在底物腔腸素存在的情況下，熒光素酶（如Rluc）催化底物發(fā)生藍光，能量轉(zhuǎn)移到EYFP（增強的黃色熒光蛋白），發(fā)出綠光（~530 nm）。通過Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白兩者間的相互關系研究蛋白-蛋白之間的相互作用。BRET的信號可通過比較綠光和藍光的量來進行測定，消減了因細胞數(shù)、細胞類型和其他實驗變量而引起的數(shù)據(jù)變量。

主要應用

1. 活體成像。

2. 報告基因檢測。
3. 檢測細胞/組織內(nèi)活性氧（ROS）水平：細胞和組織內(nèi)的超氧陰離子和過氧化亞硝基陰離子能夠增強腔腸素在酶非依賴性的氧化體系中自發(fā)熒光。

4. 高通量篩選。

5. 監(jiān)測活細胞內(nèi)鈣離子水平。

產(chǎn)品描述

腔腸素e系天然腔腸素衍生物，結構上比天然腔腸素多一個乙基。作為海腎熒光素酶的底物，其熒光強度是天然腔腸素的137%。腔腸素e具有最高的體外水母發(fā)光蛋白反應性，且具有雙發(fā)射峰（405 nm、465 nm），從而可在pCa 5-7范圍內(nèi)通過雙波長的比例測定Ca2+濃度。該法不依賴于腔腸素濃度，可提高檢測精確性。

產(chǎn)品性質(zhì)

運輸和保存方法

冰袋運輸。粉末-20℃避光干燥保存，最好保存在惰性氣體環(huán)境下，避免接觸空氣。

使用方法

腔腸素e工作液的配制

【注】：e-CTZ水溶液中不穩(wěn)定，建議使用前配制新鮮工作液

1. 溶解e-CTZ粉末于酸化乙醇，配制成1 mg/ml儲存液；

2. 利用配好的儲存液稀釋到合適濃度的水溶液，如用于光度計分析的濃度為100 μM；

3. 將儲存液于-80℃凍存。切忌凍存水溶性工作液，工作液會被氧化而明顯降低e-CTZ活性。

注意事項

1. 腔腸素e粉末最好使用惰性氣體（如氮氣或氬氣），在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，長期保存于-70℃。管內(nèi)即使有少量空氣進入，也可能造成腔腸素e氧化失活，使量化分析的結果難以在不同試驗間進行比較。
2. 腔腸素e細胞通透性較差，因此對于細胞內(nèi)Ca2+濃度測定的相關實驗，精確度無法保證。 

3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

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