產(chǎn)品描述

Hieff Canace^®II High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。該酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，經(jīng)基因工程改造而成，其蛋白結(jié)構(gòu)包含5’→3’聚合酶結(jié)構(gòu)域和3’→5’外切酶結(jié)構(gòu)域。這種組合大幅度提升了酶的耐熱性，保真性。耐熱溫度達(dá)到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。該酶主要為NGS文庫(kù)擴(kuò)增所設(shè)計(jì)，克服了擴(kuò)增不同GC含量模板帶來(lái)的GC-bias，同時(shí)擴(kuò)增效率比第一代的Canace高1.5倍，文庫(kù)擴(kuò)增產(chǎn)量大幅增加。本產(chǎn)品配備了單獨(dú)的buffer，并增加了特殊的擴(kuò)增促進(jìn)劑，具有極高的擴(kuò)增效率和廣泛的模板適應(yīng)性。

 

產(chǎn)品組分

組分編號(hào)	組分名稱(chēng)	產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格
		10140ES60	10140ES76
10140-A	Hieff Canace®II High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL)	100 μL	500 μL
10140-B	2×Canace®II PCR buffer (含Mg2+, dNTPs)	3×1 mL	15×1 mL

 

產(chǎn)品應(yīng)用

基因克??；復(fù)雜DNA模板擴(kuò)增；高通量建庫(kù)。

 

活性定義

用活性化的大馬哈魚(yú)精子DNA作為模板/引物，74°C，30 min內(nèi)，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個(gè)活性單位（U）。

 

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。-20°C保存，有效期2年。

 

注意事項(xiàng)

1. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

2. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

使用方法

在使用前，請(qǐng)務(wù)必仔細(xì)閱讀使用說(shuō)明。

1. PCR反應(yīng)體系（推薦冰上配制）

表1 PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系

組分	體積 (μL)
ddH2O	to 50
2×Canace®Ⅱ PCR buffer (含Mg2+, dNTPs)	25
模板或接頭連接產(chǎn)物	X
NGS Primer 1 (10-25 μM)	1
NGS Primer 2 (10-25 μM)	1
Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL)	1

【注】： 1) 試劑使用：使用前要充分解凍混勻；

2) 聚合酶濃度：50 μL體系推薦使用1 U，可以在0.5-2 U之間進(jìn)行優(yōu)化；

3) Mg²⁺終濃度：體系終濃度為1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl₂，以0.2-0.5 mM為間隔向上摸索；

4) 高GC模板：在體系中加入終濃度為3%的DMSO可能有利于擴(kuò)增。

2. PCR擴(kuò)增程序

表2 PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序

溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
98℃	1 min	1
98℃	10 sec	1~15（根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求）
60℃	30 sec
72℃	30 sec
72℃	5 min	1
4℃	Hold	-

HB221220