產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

MolPure^® Mag16/48 Plasmid Mini Kit（Prepackaged）磁珠法16/48孔質(zhì)粒小量提取試劑盒（預(yù)封裝）采用堿裂解法裂解細(xì)胞，通過(guò)獨(dú)特的磁珠和精心優(yōu)化的緩沖體系從菌體中提取純化高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA ，提取過(guò)程中不需要用到有毒的酚氯仿等有機(jī)物。本試劑盒適用于提取1-5 mL過(guò)夜培養(yǎng)的大腸桿菌，質(zhì)粒提取得率和質(zhì)量與質(zhì)?？截悢?shù)、宿主菌種類以及細(xì)菌培養(yǎng)條件等因素相關(guān)。從2 mL過(guò)夜培養(yǎng)的菌液中一般能夠獲得8-12 μg的高質(zhì)量質(zhì)粒DNA。本試劑盒提取到的質(zhì)粒DNA可直接用于后續(xù)酶切、轉(zhuǎn)化和測(cè)序等實(shí)驗(yàn)。

 

組分信息

 

類別	組分編號(hào)	組分名稱	18539ES16	18539ES48
PartⅠ	18539-A	RNase A	40 μL	120 μL
PartⅡ	18539-B	Buffer P1	4 mL	12 mL
	18539-C	Buffer P2	4 mL	12 mL
	18539-D	Buffer P3	4 mL	12 mL
	18539-E	96孔預(yù)裝板	1塊×1	1塊×3
	18539-F	8聯(lián)磁棒套	2條/包×1	2條/包×3

 

儲(chǔ)存條件

 

1.PartⅠ冰袋運(yùn)輸，-25~-15℃ 保存，有效期2年；

2.PartⅡ室溫運(yùn)輸，室溫保存，有效期18個(gè)月。

 

注意事項(xiàng)

 

1. 避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。
2. Buffer P2 和 Buffer P3 中含有刺激性物質(zhì)，操作過(guò)程中應(yīng)穿上實(shí)驗(yàn)服，戴好乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮膚或眼睛后，請(qǐng)立即用清水或生理鹽水沖洗，必要時(shí)尋求醫(yī)生的幫助。
3. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

 

1. 自備儀器與試劑：臺(tái)式離心機(jī)、小型離心機(jī)、渦旋振蕩儀、16/48通道核酸提取儀。
2. 首次使用前，將 RNase A (18539-A)全部加入到Buffer P1（18539-B）瓶中，充分混勻后使用，并做好標(biāo)記，儲(chǔ)存于2-8℃。
3. 使用前請(qǐng)檢查Buffer P2 (18539-C)是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀，請(qǐng)于37℃水浴重新溶解。

 

操作方法 

 

• 樣本預(yù)處理：

1. 從新鮮培養(yǎng)的平板中挑取一個(gè)單克隆菌落，接種到含對(duì)應(yīng)抗生素的 LB 培養(yǎng)基中，37℃劇烈振蕩培養(yǎng) 12-16 h。

【注】：細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間不應(yīng)超過(guò) 16 h。培養(yǎng)時(shí)間超過(guò) 16 h的細(xì)菌開始出現(xiàn)溶解現(xiàn)象，可能導(dǎo)致質(zhì)粒 DNA 的得率降低。

【注】：用于細(xì)菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基所占容器的體積不應(yīng)大于 1/4。

【注】：長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存的甘油菌中的細(xì)菌可能已經(jīng)出現(xiàn)細(xì)菌個(gè)體間基因型的分化，并混有丟失質(zhì)粒的細(xì)菌。甘油菌必須在含有抗生素的平板上劃線篩選，挑選生長(zhǎng)良好的單菌落用于接種培養(yǎng)。

2. 取 1-5 mL 過(guò)夜培養(yǎng)的菌液，12,000 rpm 離心 1 min，吸棄上清液，收集菌體沉淀。

【注】：菌液較多時(shí)，可通過(guò)多次離心將菌體沉淀收集在一個(gè)離心管中。

3. 向菌體沉淀中加入 250 µL Buffer P1，吹打或渦旋重懸菌體沉淀。

【注】：確保菌體徹底重懸，否則影響得率和質(zhì)量。

【注】：確保Buffer P1中已添加 RNase A。

4. 加入 250 µL Buffer P2，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次以充分裂解菌體。

【注】：使用 Buffer P2 前確認(rèn)溶液中沒(méi)有沉淀存在；Buffer P2 使用完后應(yīng)蓋緊瓶蓋，避免與空氣長(zhǎng)期接觸。

【注】：裂解時(shí)間與菌量相關(guān)，當(dāng)細(xì)菌裂解充分時(shí)，溶液應(yīng)呈粘稠的透明狀；如果達(dá)不到上述效果，可能是細(xì)菌用量過(guò)多所致，可增加

翻轉(zhuǎn)的次數(shù)以達(dá)到粘稠的透明狀,此步驟最長(zhǎng)不能超過(guò)5 min。

【注】：此步驟不可用旋渦振蕩器混勻，否則將導(dǎo)致最后制備的質(zhì)粒中混有基因組 DNA。

5. 加入 250 µL Buffer P3，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次充分混勻，此時(shí)將出現(xiàn)白色絮狀沉淀。12,000 rpm 室溫離心 10 min ，小心地將吸取 700 μL上清液至新的1.5 mL離心管中，此為樣本預(yù)處理液。

• 自動(dòng)化提?。?/font>

1. 從試劑盒中取出預(yù)裝板，正反顛倒數(shù)次使磁珠重懸，輕甩孔板使試劑和磁珠都集中到孔板底部，小心撕去預(yù)裝板封膜。
2. 小心地吸取樣本預(yù)處理液至樣品處理孔（第1/7列）。
3. 將預(yù)裝板正確安放在核酸提取儀中，并正確安裝磁棒套。
4. 運(yùn)行如下程序，程序結(jié)束后，將洗脫得到的核酸溶液（第5/11列）轉(zhuǎn)移至新的離心管中，溶液可置于-20℃短期保存，-80℃長(zhǎng)期保存。

翌圣16通道自動(dòng)化核酸提取儀AP-16S提取程序

步驟	第1步	第2步	第3步	第4步	第5步	第6步	第7步
工位	3	1	2	3	4	5	3
等待時(shí)間	00:00:00	00:00:00	00:00:00	00:00:00	00:00:00	00:04:00	00:00:00
混合模式	M1	M3	M3	M2	M2	M3	M1
混合時(shí)間	00:00:12	00:05:00	00:02:00	00:01:30	00:01:00	00:06:00	00:00:12
是否暫停	否	否	否	否	否	否	否
吸磁時(shí)間	00:00:30	00:01:20	00:00:30	00:00:30	00:00:30	00:01:20	00:00:00
體積	500 μL	1000 μL	500 μL	500 μL	500 μL	70 μL	500 μL
溫度	-	-	-	-	-	65 ℃	-

 

翌圣48通道自動(dòng)化核酸提取儀AP48提取程序

步驟	第1步	第2步	第3步	第4步	第5步	第6步	第7步
工位	3	1	2	3	4	5	3
等待時(shí)間	00:00:00	00:00:00	00:00:00	00:00:00	00:00:00	00:04:00	00:00:00
混合模式	M1	M3	M3	M2	M2	M3	M1
混合時(shí)間	00:00:12	00:05:00	00:02:00	00:01:30	00:01:00	00:06:00	00:00:12
是否暫停	否	否	否	否	否	否	否
吸磁時(shí)間	00:00:30	00:01:20	00:00:30	00:00:30	00:00:30	00:01:20	00:00:00
體積	500 μL	1000 μL	500 μL	500 μL	500 μL	70 μL	500 μL
溫度	-	-	-	-	-	65 ℃	-
混合模式	M1	混合時(shí)間10 s，混合速度100000
混合模式	M2	混合時(shí)間10 s，混合速度200000
混合模式	M3	混合時(shí)間10 s，混合速度300000

 

Ver.CN20240729