產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
非洲豬瘟qPCR檢測(cè)試劑盒是一款采用公司新一代抗體法熱啟動(dòng)Taq酶的熒光定量預(yù)混液。本產(chǎn)品包含了非洲豬瘟全預(yù)混反應(yīng)液，陰性對(duì)照（RNase-free H2O）以及陽(yáng)性對(duì)照、內(nèi)標(biāo)。其中全預(yù)混反應(yīng)液包含反應(yīng)緩沖液、酶mix和引物探針，采用dUTP代替dTTP，并添加了有效抑制非特異性PCR擴(kuò)增的因子，大大減少了非特異性PCR擴(kuò)增和污染，能夠保證引物效率。本產(chǎn)品含有UDG酶，可有效防止氣溶膠污染的風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)利用儀器對(duì)PCR過(guò)程中相應(yīng)通道的信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性分析。
產(chǎn)品信息
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貨號(hào) |
11869ES25/11869ES60/11869ES80/11869ES92 |
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規(guī)格 |
25 T/100 T/1,000 T/10,000 T |
組分信息
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組分編號(hào) |
組分名稱 |
11869ES25 （25 T） |
11869ES60 （100 T） |
11869ES80 （1,000 T） |
11869ES92 （10,000T） |
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11869-A |
全預(yù)混反應(yīng)液 |
500 μL |
2×1 mL |
20 mL |
200 mL |
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11869-B |
陰性對(duì)照 |
125 μL |
500 μL |
5 mL |
50 mL |
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11869-C |
陽(yáng)性對(duì)照 |
125 μL |
500 μL |
5 mL |
10 mL |
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11869-D |
內(nèi)標(biāo) |
25 μL |
100 μL |
1 mL |
10 mL |
*用于全血、血清、淋巴結(jié)、脾臟、腎臟、扁桃體、肺、肌肉、環(huán)境樣品等樣品中非洲豬瘟病毒核酸的檢測(cè)。
儲(chǔ)存條件
-25~-15℃保存，有效期1年。11869-A避光保存。
使用說(shuō)明
- 操作說(shuō)明
- 操作步驟
將20 μL PCR反應(yīng)混合液加入每個(gè)0.2 mL PCR擴(kuò)增管；將5 μL DNA模板加入PCR擴(kuò)增管中。每次進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)均應(yīng)設(shè)立陽(yáng)性、陰性對(duì)照。加入模板后，密封反應(yīng)管，瞬時(shí)離心。將所有PCR擴(kuò)增管放在熒光PCR儀上進(jìn)行檢測(cè)，F(xiàn)AM通道采集熒光信號(hào)，Cy5通道采集內(nèi)標(biāo)信號(hào)。
2）反應(yīng)體系
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組分 |
體積（μL） |
終濃度 |
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11869-A |
20 |
1× |
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模板 |
5 |
- |
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ddH2O |
up to 25 |
- |
*在環(huán)境樣本檢測(cè)時(shí)，推薦在樣本中加入內(nèi)標(biāo)進(jìn)行提取驗(yàn)證，通常是100 μL樣本加入1 μL進(jìn)行提取。
- 參考擴(kuò)增程序
1）常規(guī)擴(kuò)增程序
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步驟 |
溫度 |
時(shí)間 |
循環(huán)數(shù) |
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污染消化 |
37℃ |
5 min |
1 |
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預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
1 |
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變性 |
95℃ |
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45 |
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退火/延伸 |
60℃ |
30 sec |
- 快速擴(kuò)增程序
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步驟 |
溫度 |
升/降溫速率 |
時(shí)間 |
循環(huán)數(shù) |
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污染消化 |
37℃ |
3.19℃/S |
2 min |
1 |
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預(yù)變性 |
95℃ |
3.19℃/S |
2 min |
1 |
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變性 |
95℃ |
3.19℃/S |
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45 |
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退火/延伸 |
60℃ |
2.45℃/S |
10 sec |
*擴(kuò)增反應(yīng)：擴(kuò)增反應(yīng)溫度根據(jù)設(shè)計(jì)的引物Tm值進(jìn)行調(diào)整；熒光信號(hào)采集：不同的qPCR儀器所需的熒光信號(hào)采集時(shí)間不同，請(qǐng)根據(jù)最短時(shí)間限制進(jìn)行設(shè)置。
- 適用機(jī)型
Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex;
Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;
Stratagene: MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.
結(jié)果判定
- 試劑盒有效性判定
1）11869-C陽(yáng)性對(duì)照，F(xiàn)AM通道Ct值應(yīng)Ct≤38且出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線；
2）11869-B陰性對(duì)照，F(xiàn)AM、Cy5通道應(yīng)無(wú)Ct值或Ct值≥38且無(wú)特異性擴(kuò)增曲線。
- 檢測(cè)結(jié)果的判定
根據(jù)下表對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行判定
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FAM |
Cy5 |
結(jié)果判定 |
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1 |
Ct≥40或UNDET |
Ct≤38 |
陰性 |
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2 |
Ct≤38 |
Ct≤38 |
陽(yáng)性 |
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3 |
38<Ct≤40 |
Ct≤38 |
需重新測(cè)試，Ct值仍在此區(qū)間且曲線呈標(biāo)準(zhǔn)“S”型，則判斷為陽(yáng)性，否則判斷為陰性 |
注意事項(xiàng)
- 本產(chǎn)品僅作科研用途。
- 試劑盒不同組分間不得交叉，防止污染。
- PCR 產(chǎn)物均應(yīng)合理處理，以免造成污染。
- 嚴(yán)格按照使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
- 按要求貯藏，冷鏈運(yùn)輸；并在有效期內(nèi)使用。
