產(chǎn)品說明書
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產(chǎn)品簡介
新型冠狀病毒2019-nCoV、甲型流感病毒、乙型流感病毒核酸檢測試劑盒采用實時熒光PCR 技術(shù)，以新型冠狀病毒2019-nCoV、甲型流感病毒和乙型流感病毒基因編碼區(qū)的一段保守區(qū)作為目標區(qū)域，分別設(shè)計新型冠狀病毒2019-nCoV、甲型流感病毒和乙型流感病毒的特異性引物和特異性TaqMan熒光探針，實現(xiàn)對新型冠狀病毒2019-nCoV、甲型流感病毒和乙型流感病毒RNA 核酸片段的分型檢測。其中，新型冠狀病毒2019-nCoV探針標記FAM熒光素，甲型流感病毒探針標記VIC熒光素、乙型流感病毒探針標記ROX熒光素、內(nèi)標探針標記CY5熒光素。本試劑盒包括新型冠狀病毒2019-nCoV、甲型流感病毒及乙型流感病毒的檢測反應液、RTase Mix、陰性對照和新冠甲乙型流感病毒陽性對照等檢測試劑盒成分。
產(chǎn)品信息
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貨號 |
11814ES60 / 11814ES80 / 11814ES92 |
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規(guī)格 |
25 T / 50 T / 100 T |
組分信息
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組分編號 |
組分名稱 |
11814ES60(25 T) |
11814ES80(50 T) |
11814ES92(100 T) |
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11814-A |
反應液 |
281.25 μL |
562.5 μL |
1125 μL |
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11814-B |
RTase Mix |
37.5 μL |
75 μL |
150 μL |
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11814-C |
陰性對照 |
250 μL |
500 μL |
1 mL |
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11814-D |
陽性對照 |
250 μL |
500 μL |
1 mL |
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11814-E |
DEPC H2O |
125 μL |
250 μL |
500 μL |
【注】1. 反應液是新型冠狀病毒2019-nCoV、甲型流感病毒、乙型流感病毒反應液的簡稱，包括dNTPs、dUTP、Mg2+、穩(wěn)定劑、增強劑；新型冠狀病毒2019-nCoV、甲型流感病毒、乙型流感病毒及內(nèi)參的引物和探針。
2. RTase Mix主要含有耐熱Hifair® V逆轉(zhuǎn)錄酶、UNICON® HotStart Taq DNA聚合酶。
儲存條件
- -25~-15℃保存，有效期1年。
- 試劑盒部件凍融5次以下不影響檢測結(jié)果。
使用說明
- 試劑準備（試劑準備區(qū)）
從試劑盒中取出核酸擴增反應液、酶混合液室溫融化，充分震蕩混勻后瞬時離心。
計算試劑使用份數(shù)N (N=樣本數(shù)+1管陽性對照+1管陰性對照+1）根據(jù)下表配置反應體系，充分震蕩混勻后瞬時離心，按照每15 μL 分裝到PCR 反應管中，然后轉(zhuǎn)移到樣本處理區(qū)：
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組分 |
體積（μL） |
終濃度 |
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反應液 |
11.25 |
1× |
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RTase Mix |
1.5 |
- |
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DEPC H2O |
2.25 |
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總體積 |
15 |
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- 樣本處理（樣本處理區(qū)）
核酸提?。捍郎y樣本、陽性對照及陰性對照均按照核酸提取試劑盒說明書進行操作。
加樣：在上述分裝好反應液的PCR 反應管中分別加入提取好的待測樣本核酸、陽性對照和陰性對照各10 μL，終體積為25 μL/管，蓋緊管蓋，瞬時離心。
- PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）
將PCR 反應管放置在熒光定量PCR儀中進行擴增檢測。
反應程序可以根據(jù)需求設(shè)置標準擴增程序或者快速擴增程序：
1）標準擴增程序
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
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逆轉(zhuǎn)錄 |
50℃a |
10 min |
1 |
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預變性 |
95℃ |
5 min |
1 |
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擴增反應 |
95℃ |
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45 |
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60℃b |
30 secc |
2）快速擴增程序
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
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逆轉(zhuǎn)錄 |
50℃a |
2 min |
1 |
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預變性 |
95℃ |
2 min |
1 |
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擴增反應 |
95℃ |
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41 |
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60℃b |
13 secc |
【注】a. 逆轉(zhuǎn)錄：42℃或者50℃均可。
b. 擴增反應：擴增反應溫度根據(jù)設(shè)計的引物Tm值進行調(diào)整。
c. 熒光信號采集：采集熒光信號(FAM/VIC/ROX/CY5)，ABI7500儀器不選ROX 校正熒光，淬滅基團選None。
4. 結(jié)果分析參數(shù)設(shè)定
根據(jù)分析后的擴增曲線圖調(diào)整基線起止值，建議起始設(shè)在3-15、終止設(shè)在5-20；同時調(diào)整陰性對照的擴增曲線使其平直或者低于閾值線。點擊分析，在報告頁面查看結(jié)果。
5.適用機型
Bio-Rad CFX96™ Dx System (S/W version 3.1, Bio-Rad)
ABI 7500（S/W version 2.0.6）,QuantStudio™ 5
注意事項
1. 實驗過程中請使用RNase free耗材。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
