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COA
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產品簡介
Hifair® Superpro Ⅱ One Step RT-qPCR Master Mix是以RNA為模板進行單重或多重定量PCR反應的一管式全預混試劑盒。在實驗的過程中，逆轉錄和定量PCR在同一反應管中進行，簡化了實驗操作，降低了污染的風險。
本試劑盒采用了新一代抗體法熱啟動酶、耐熱Hifair® V Reverse Transcriptase和針對一管式全預混RT-qPCR 的特殊緩沖體系，實現(xiàn)引物探針提前預混，配成的反應液使用時只需加入模板即可。同時添加了dUTP/UDG 系統(tǒng)，可有效防止氣溶膠污染的風險。
產品信息
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貨號 |
11899ES50 / 11899ES60 / 11899ES80 / 11899ES92 |
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規(guī)格 |
50 T / 100 T / 1000 T / 10000 T |
組分信息
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組分編號 |
組分名稱 |
11899ES50 (50 T) |
11899ES60 (100 T) |
11899ES80 (1000 T) |
11899ES92 (10000 T) |
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11899 |
2×Hifair® Superpro Ⅱ Master Mix |
700 μL |
1.4 mL |
14 mL |
140 mL |
【注】 2×Hifair® Superpro Ⅱ Master mix為Hifair® Superpro Ⅱ One Step RT-qPCR Master Mix 的簡寫,其中包含dNTPs,dUTP, Mg2+ , stabilizers, enhancers, Hifair® V Reverse Transcriptase、UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase 和 UDGase 等。
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用說明
- 反應體系（以25 μL為例）
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組分 |
體積（μL） |
終濃度 |
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2×Hifair® Superpro Ⅱ Master Mix |
14 * |
1× |
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Primer & Probe Mix |
1 ** |
0.4 μM |
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模板RNA |
10 *** |
- |
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總體積 |
25 |
- |
* 預混液添加體積為14 μL時，含引物探針的預混效果最好。
** 引物探針的體積為1μL時，含引物探針的預混效果最好。
*** 產品形式為含引物探針的全預混形式時，模板的添加量不建議小于10 μL，否則全預混的穩(wěn)定性效果和預期可能會有偏差。
【注】1). 已驗證過在該產品中加入引物探針的全預混液在37℃放置5天性能不下降。但是不同引物探針的預混穩(wěn)定性不一致，若全預混穩(wěn)定性效果較差，建議更換引物探針進一步測試。
2). Primer & Probe Mix 中包含多對引物和探針，通常每條引物終濃度可以根據(jù)情況在 0.1-1.0 μM 間進行調整；探針終濃度也可以根據(jù)對熒光曲線和熒光增峰的要求在 0.05-0.5 μM范圍內進行調整。
3). qPCR靈敏度極高，建議將模板進行稀釋使用，控制Ct在20-35之間適宜。
4). 請于超凈工作臺內配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應管；推薦使用帶濾芯的槍頭，避免交叉污染和氣溶膠污染。
- 參考擴增程序
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
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逆轉錄 |
50℃a |
10 min |
1 |
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預變性 |
95℃ |
5 min |
1 |
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擴增反應 |
95℃ |
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40-45 cycles |
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60℃b |
30 secc |
【注】a. 逆轉錄：42℃或者50℃均可，時間 10-15 min。
b. 擴增反應：擴增反應溫度根據(jù)設計的引物Tm值進行調整。
c. 熒光信號采集：不同的qPCR檢測儀器所需的熒光信號采集時間不同，請根據(jù)最短時間限制進行設置。
- 適用機型
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；
Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR
注意事項
1. 實驗過程中請使用RNase free耗材。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
