產(chǎn)品描述

 

HEK-293T SV40gp6 (HEK-293TT) Cell Line是一種能過(guò)表達(dá)SV40 Large T的細(xì)胞株，特異性的與人乳頭瘤病毒（HPV）結(jié)合，能很好的模擬HPV病毒感染細(xì)胞的路徑?？捎糜谥泻涂贵w滴度測(cè)定、抑制劑篩選、病毒入侵研究以及HPV疫苗開(kāi)發(fā)

本細(xì)胞系是將SV40 Large T過(guò)表達(dá)慢病毒感染293T細(xì)胞并篩選得到的穩(wěn)定株。

 

保存方法

 

-80℃保存，如長(zhǎng)期儲(chǔ)存需保存–196°C以下。

 

使用方法

 

1、細(xì)胞復(fù)蘇

a) 37℃水浴鍋預(yù)熱復(fù)蘇培養(yǎng)基，加入預(yù)熱后的復(fù)蘇培養(yǎng)基5 mL至15 mL離心管。

b) 從液氮中取出凍存細(xì)胞并迅速放入37℃恒溫水浴鍋，將細(xì)胞液面浸至水面以下輕輕搖動(dòng)解凍，直到剛剛?cè)诨ㄍǔ?-3分鐘）。

c) 用70%乙醇擦拭凍存管外部以降低污染的幾率。在生物安全柜或超凈臺(tái)中將凍存管中的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到步驟a）的離心管中，輕輕混勻，176 × g，離心3 min，使細(xì)胞沉淀，棄上清。

d) 使用1 mL復(fù)蘇培養(yǎng)基重懸，可取出部分使用臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞，活細(xì)胞≥ 3 × 10⁶ cells/mL。

e) 通過(guò)補(bǔ)加復(fù)蘇培養(yǎng)基的形式，調(diào)整細(xì)胞密度到1~2×10⁵ cells/mL，根據(jù)細(xì)胞懸液總體積，將細(xì)胞接種到合適的培養(yǎng)皿中。

注：

細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)基：	DMEM+10% FBS+1%雙抗
細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基：	DMEM+10% FBS+1%雙抗+0.75 μg/mL Puromycin
細(xì)胞凍存液：	90% FBS+10% DMSO

2、細(xì)胞傳代

注：細(xì)胞復(fù)蘇后的1至2代，使用復(fù)蘇培養(yǎng)基，待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，再更換為含有抗生素的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

1. 細(xì)胞為上皮細(xì)胞，貼壁生長(zhǎng)。培養(yǎng)箱中孵育16-24 h后，鏡下觀察細(xì)胞貼壁情況，當(dāng)細(xì)胞密度大于60%，即可進(jìn)行細(xì)胞傳代。推薦細(xì)胞傳代比例為1:3-1:4，1-2天傳代。
2. 將皿或培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液棄去，10 cm皿加2 mL PBS潤(rùn)洗1次。
3. 棄PBS，加1 mL 0.25% Trypsin-EDTA消化液，37°C消化30-60 s，顯微鏡下觀察。
4. 待細(xì)胞變圓，細(xì)胞間隙明顯，部分細(xì)胞剛開(kāi)始脫離瓶壁時(shí)，加1 mL左右生長(zhǎng)培養(yǎng)基混勻終止消化，將細(xì)胞小心吹打下來(lái)，176 × g室溫離心3 min。棄上清，細(xì)胞沉淀用生長(zhǎng)培養(yǎng)基重懸，根據(jù)傳代前細(xì)胞密度分盤（根據(jù)培養(yǎng)皿面積和細(xì)胞密度計(jì)算，傳代后細(xì)胞密度為15-20%）

3、細(xì)胞凍存

a) 使用176 × g，3 min離心收集細(xì)胞。使用預(yù)冷細(xì)胞凍存液（90% FBS + 10% DMSO）重懸細(xì)胞，細(xì)胞密度調(diào)整為5 × 10⁶ cells/mL，每管1 mL分裝到細(xì)胞凍存管中。

b) 擰緊蓋子，適當(dāng)標(biāo)記后，將凍存管置于梯度降溫盒中，-80℃下保存至少1天，盡快轉(zhuǎn)移至液氮中。

 

細(xì)胞驗(yàn)證

1、不同亞型驗(yàn)證結(jié)果

Fig 1. 使用 1 μL不同HPV亞型的假病毒感染HEK-293T SV40gp6 (HEK-293TT) Cell Line后的檢測(cè)結(jié)果

2、穩(wěn)定性驗(yàn)證結(jié)果

Fig 2. 使用梯度稀釋HPV16假病毒感染P5、P15、P25三個(gè)不同代次的HEK-293T SV40gp6 (HEK-293TT) Cell Line檢測(cè)結(jié)果表明細(xì)胞的穩(wěn)定性良好，不同代次的細(xì)胞被HPV感染的luciferase數(shù)值差異不大

3、SV40T氨基酸序列（NP_043127.1）

MDKVLNREESLQLMDLLGLERSAWGNIPLMRKAYLKKCKEFHPDKGGDEEKMKKMNTLYKKMEDGVKYAHQPDFGGFWDATEIPTYGTDEWEQWWNAFNEENLFCSEEMPSSDDEATADSQHSTPPKKKRKVEDPKDFPSELLSFLSHAVFSNRTLACFAIYTTKEKAALLYKKIMEKYSVTFISRHNSYNHNILFFLTPHRHRVSAINNYAQKLCTFSFLICKGVNKEYLMYSALTRDPFSVIEESLPGGLKEHDFNPEEAEETKQVSWKLVTEYAMETKCDDVLLLLGMYLEFQYSFEMCLKCIKKEQPSHYKYHEKHYANAAIFADSKNQKTICQQAVDTVLAKKRVDSLQLTREQMLTNRFNDLLDRMDIMFGSTGSADIEEWMAGVAWLHCLLPKMDSVVYDFLKCMVYNIPKKRYWLFKGPIDSGKTTLAAALLELCGGKALNVNLPLDRLNFELGVAIDQFLVVFEDVKGTGGESRDLPSGQGINNLDNLRDYLDGSVKVNLEKKHLNKRTQIFPPGIVTMNEYSVPKTLQARFVKQIDFRPKDYLKHCLERSEFLLEKR

IIQSGIALLLMLIWYRPVAEFAQSIQSRIVEWKERLDKEFSLSVYQKMKFNVAMGIGVLDWLRNSDDDDEDSQENADKNEDGGEKNMEDSGHETGIDSQSQGSFQAPQSSQSVHDHNQPYHICRGFTCFKKPPTPPPEPET

 

注意事項(xiàng)

 

1）細(xì)胞系產(chǎn)品干冰運(yùn)輸。

2）接觸產(chǎn)品請(qǐng)帶手套。請(qǐng)收到產(chǎn)品立即確認(rèn)產(chǎn)品是否為凍存狀態(tài)。

3）本產(chǎn)品相關(guān)實(shí)驗(yàn)，應(yīng)在二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室或生物安全柜中進(jìn)行。

4）本產(chǎn)品僅作研究用途！

 

Ver.CN20241212