產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

翌圣小鼠CD4+T細(xì)胞分選試劑盒（陰選）是通過(guò)陰性分選法從小鼠淋巴結(jié)、脾臟及其混合樣本中分離、純化CD4+T細(xì)胞。其原理是選用生物素（biotin）標(biāo)記單克隆抗體Cocktail對(duì)非目標(biāo)細(xì)胞（非CD4+T細(xì)胞）進(jìn)行標(biāo)記，而后通過(guò)鏈霉親和素（streptavidin）標(biāo)記的磁珠對(duì)非目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行清除，從而得到無(wú)磁珠標(biāo)記的小鼠CD4+T細(xì)胞。

 

產(chǎn)品特點(diǎn)

 

操作簡(jiǎn)單：無(wú)需分選柱，使用磁性分離器即可實(shí)現(xiàn)目的細(xì)胞的分離。

純度高：分選細(xì)胞純度可達(dá)95%以上；

活性好：陰性分選，磁珠不與細(xì)胞直接接觸，分選后細(xì)胞無(wú)異常激活，不影響下游實(shí)驗(yàn)。

速度快：15分鐘即可分選得到目的細(xì)胞。

 

產(chǎn)品信息

 

編號(hào)	組分名稱	37657ES10（10 T） 分選能力：Up to 1×108 cells	37657ES50（50 T） 分選能力：Up to 5×108 cells	37657ES60（100 T） 分選能力：Up to 1×109 cells
37657-A	Mouse CD4+T Cell Negative Antibody Cocktail	20 μL	100 μL	200 μL
37657-B	Streptavidin Magnetic Beads	0.2 mL	1 mL	2 mL

 

儲(chǔ)存條件

 

2~8℃保存，有效期1年，嚴(yán)禁凍存。

 

使用說(shuō)明

 

1. 所需材料準(zhǔn)備

1）分離緩沖液：含有 2 mM EDTA和2%胎牛血清（FBS）的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS，需預(yù)先通過(guò)0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌。

2）分選材料和分離器：無(wú)菌流式管或離心管，磁性分離器。

2. 細(xì)胞分選，以分選小鼠脾臟CD4+T細(xì)胞為例：

1）制備單細(xì)胞懸液：在70 μm細(xì)胞篩網(wǎng)上研磨脾臟，以預(yù)冷的PBS沖洗細(xì)胞篩網(wǎng)，收集細(xì)胞懸液于50 mL離心管中，2000 rpm（500 g），離心5 min。

2）離心結(jié)束，棄上清，加入5 mL紅細(xì)胞裂解液，吹打混勻，室溫裂解 5 min，再加入20 mL PBS終止反應(yīng)，2000 rpm（500 g），離心5 min。

注意：紅細(xì)胞裂解步驟可根據(jù)所用裂解液不同調(diào)整用量及時(shí)間。少量紅細(xì)胞殘留不會(huì)影響后續(xù)分選及細(xì)胞純度。 

3）離心完成后，棄上清，將脾細(xì)胞重懸于PBS，細(xì)胞懸液用70 μm細(xì)胞篩網(wǎng)過(guò)濾后，計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)完成后，2000 rpm（500 g），離心 5 min。

注意：細(xì)胞懸液需要過(guò)細(xì)胞篩網(wǎng)，以除去組織和細(xì)胞團(tuán)塊，否則會(huì)影響后續(xù)細(xì)胞分選純度。

4）離心完成后，棄上清，將細(xì)胞重懸于分離緩沖液中，調(diào)整細(xì)胞密度為 1×10⁸ cells/mL。

5） 吸取100 μL細(xì)胞懸液（1×10⁷ cells）加入無(wú)菌流式管底部，再加入2 μL Mouse CD4+T Cell Negative Antibody Cocktail（37657-A），混勻后 4°C孵育 10 min。

注意：加入細(xì)胞懸液時(shí)將細(xì)胞加入流式管底部，避免沿流式管管壁加入。根據(jù)所使用磁力架不同也可使用離心管進(jìn)行細(xì)胞分選。

如果分選更多細(xì)胞，則按比例增加 Mouse CD4+T Cell Negative Antibody Cocktail（37657-A）的用量。 

6）孵育完成后，在流式管中加入20 μL清洗過(guò)的Streptavidin Magnetic Beads（37657-B）, 混勻后 4°C 孵育10 min。

注意：磁珠使用前需用分離緩沖液進(jìn)行清洗：渦旋振蕩重懸磁珠，吸取實(shí)驗(yàn)需要的磁珠至1.5 mL離心管，加入 1 mL分離緩沖液，10000 g 離心 1min，棄上清。加入 1 mL分離緩沖液重復(fù)洗滌磁珠1次后用與原來(lái)相同體積的分離緩沖液重懸磁珠。如吸取20 μL磁珠進(jìn)行清洗，則清洗后用 20 μL 分離緩沖液進(jìn)行重懸）。

如果分選更多細(xì)胞，則按比例增加Streptavidin Magnetic Beads（37657-B）用量。

如果分選少于 1×10⁷ cells，則將細(xì)胞懸液體積補(bǔ)至 100 μL，加入 2 μL Mouse CD4+T Cell Negative Antibody Cocktail（37657-A）和      20 μL Streptavidin Magnetic Beads（37657-B）。

7）孵育完成后，在流式管中加入2.5 mL分離緩沖液，用移液器上下混合吹打5次混勻（避免劇烈振蕩或者上下顛倒混勻）。

8）將含有細(xì)胞的分選流式管置于磁力架上，靜置 5 min。

9）將細(xì)胞懸液輕柔倒入一個(gè)無(wú)菌離心管中（傾倒過(guò)程中流式管不要脫離磁力架），此細(xì)胞懸液中即包含純化的小鼠CD4 + T 細(xì)胞，2000 rpm（500 g），離心 5 min。離心后棄上清，收集細(xì)胞。

10）根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要洗滌細(xì)胞后，將細(xì)胞重懸于所需緩沖液或培養(yǎng)基中，即可用于后續(xù)分子生物學(xué)或細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

 

注意事項(xiàng)

 

1. Negative Antibody Cocktail和Streptavidin Magnetic Beads使用和保存過(guò)程中應(yīng)避免冷凍；

2. 建議選用低吸附離心管和吸頭，避免因吸附造成磁珠和抗體的損耗；

3. 本產(chǎn)品需與磁性分離器配套使用；

4. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20250320