產(chǎn)品說明書
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產(chǎn)品描述
YEASEN rProtein L Agarose Resin是用于分離和純化單克隆抗體的通用性親和層析介質(zhì)，具體性能見產(chǎn)品性質(zhì)。Protein L 經(jīng)過基因重組，由大腸桿菌表達，保留了與抗體K鏈結(jié)合的特性，同時不會影響抗體的抗原結(jié)合位點。Protein L與protein A和Protein G 相比，更能廣泛地結(jié)合各種來源及亞類的抗體，包括人、小鼠、大鼠、兔和雞，但不結(jié)合牛、山羊或綿羊來源的免疫球蛋白。
產(chǎn)品性質(zhì)
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指標 |
性能 |
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基質(zhì)（Matrix） |
4%瓊脂糖微球 |
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配體（Ligand） |
重組蛋白L |
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孔徑（Bead size） |
45-165 µm |
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最大流速（Flowmax） |
0.1 MPa,1bar |
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儲存緩沖液（Buffer） |
20% 乙醇 |
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載量（Capacity） |
＞15 mg human IgG/mL介質(zhì) |
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pH范圍（pH range） |
3-10 |
運輸與保存方法
冰袋運輸。2-8℃保存，2年有效。
需準備試劑
【注】建議以下緩沖液在使用前用0.22 μm或0.45 μm濾膜過濾。
結(jié)合/洗雜緩沖液：0.15 M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH7.0
洗脫緩沖液：0.1 M甘氨酸，pH 3.0
中和液：1 M Tris-HCl，pH 8.5
使用方法
【注】上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強度和pH值，可以用結(jié)合/洗滌緩沖液對血清樣品、腹水或細胞培養(yǎng)液稀釋，或者樣品用結(jié)合/洗滌緩沖液透析。
1樣品純化（以Akta系統(tǒng)為例）
1）準備：將泵管道中注滿去離子水。去掉上塞子，將層析柱連接至色譜系統(tǒng)中。再折斷下口，將預(yù)裝柱接到色譜系統(tǒng)中，并旋緊。
2）清洗：3-5倍柱體積去離子水沖洗層析柱中儲存液。
3）平衡：將rProtein L Beads 裝入合適的層析柱，用5倍柱體積的結(jié)合Buffer平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護蛋白的作用。
4）上樣：將樣品加到平衡好的rProtein L Beads中，推薦流速1 mL/min，保證目的蛋白與樹脂充分接觸，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待檢測。
【注】樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少，也會導(dǎo)致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過柱子的結(jié)合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進樣器更難使用。
5）洗雜：用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進行清洗，直到紫外吸收達到一個穩(wěn)定的基線，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。
6）洗脫：用洗脫Buffer 采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫中，通常5倍柱體積洗脫液足夠?qū)⒛康牡鞍紫疵撓聛?。也可以用一個小的梯度，例如5-10倍柱體積或更多，來分離不同結(jié)合強度的蛋白質(zhì)。
7）清洗及保存：依次使用3倍柱體積的結(jié)合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，最后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被細菌污染。
2 SDS-PAGE檢測
將純化過程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進行檢測，判定其純化效果。
3 樹脂清洗
隨著一些變性物質(zhì)的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量下降，影響柱子的性能，這時需對柱子進行清洗：
1）去除沉淀或變性物質(zhì)
① 用2倍柱體積的6 M 鹽酸胍溶液進行清洗；
② 用5倍柱體積的PBS，pH 7.4 清洗。
2）去除由于疏水性吸附造成的非特異吸附物質(zhì)
① 用3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積的1% Triton™ X-100清洗；
② 用5倍柱體積的PBS, pH 7.4 清洗。
注意事項
1）請勿冷凍保存本產(chǎn)品。
2）所有操作過程中，樣本需要在4℃或冰上操作。
3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4）本產(chǎn)品僅作科研用途！
附錄1 常見問題與解答
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問題 |
可能原因 |
推薦解決方法 |
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柱子反壓過高 |
填料被堵塞 |
清洗填料 |
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裂解液中含有微笑的固體顆粒，建議上柱前使用0.22 µm/0.45 µm濾膜過濾。 |
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樣品純化過程中曲線不穩(wěn) |
樣品或 buffer 中有氣泡 |
趕出氣泡 |
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樣品和buffer進行脫氣 |
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洗脫組分中沒有目的蛋白 |
樣品中抗體濃度太低 |
使用其抗原做配體的介質(zhì) |
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抗體被降解 |
適當?shù)奶岣呦疵?/font>pH |
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回收率逐漸減低 |
上樣量太多 |
減少上樣量 |
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柱子太臟，載量降低 |
清洗樹脂 |
HB210824
