MolPure^® Blood RNA Kit 適用于血液、血漿、血清、淋巴液等樣品中 RNA 的提取。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司特有新型材料，配合本公司獨特的裂解液配方可以可最大限度的回收高純度 RNA。提取的 RNA 純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，可適用于各種下游應(yīng)用實驗，如 RT-PCR、RT-qPCR、體外轉(zhuǎn)錄、分子克隆等。

 

產(chǎn)品組分

類別	編號	組分名稱	19241ES50（50 T）
Part I	19241-A	裂解液 LB (LB Buffer B3)	50 mL
Part II	19241-B	RNA 吸附柱 B3 (MolPure® RNA Column B3)	50 個
	19241-C	2 mL 收集管 (2 mL Collection Tube B3)	50 個
	19241-D	去蛋白液 PL (PL Buffer B3)	25 mL
	19241-E	漂洗液 W* (Wash Buffer*)	12 mL
	19241-F	RNase-free H2O	5 mL

 

運(yùn)輸和保存方法

常溫運(yùn)輸。

Part I 組分 4℃避光保存，Part II 組分常溫保存。產(chǎn)品有效期 12 個月。

 

注意事項

避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。

注意觀察各溶液是否有析出或渾濁（尤其冬季等室溫為低溫環(huán)境時），可 37℃溫浴復(fù)溶至溶液澄清，避免影響使用效果。

裂解液LB 和去蛋白液 PL 含有刺激性物質(zhì)，為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

實驗前準(zhǔn)備

自備設(shè)備和試劑：臺式離心機(jī)、振蕩儀、水浴鍋或金屬浴，氯仿、無水乙醇，RNase-free 離心管等。

除特殊指明外，所有的離心步驟均在室溫完成，使用可以達(dá)到 12,000 rpm 轉(zhuǎn)速的傳統(tǒng)臺式離心機(jī)。

首次使用前，須在漂洗液 W*（19241-E）瓶中加入 4 倍體積的無水乙醇，充分混勻后使用，并做好標(biāo)記。如果發(fā)現(xiàn)漂洗液 W*由于運(yùn)輸或保管不當(dāng)造成容量嚴(yán)重不準(zhǔn)，請用量筒定容后再加入 4 倍體積的無水乙醇。每次使用后將瓶蓋蓋緊，以保持漂洗液 W*中的乙醇含量。

 

操作方法

一、樣本預(yù)處理：

取 250 μL 血液（或血清、血漿、腦脊液等液體樣本）轉(zhuǎn)移至 1.5 mL 的 RNase-free 離心管中。

【注】：不足 250 μL 時，需用 PBS 或生理鹽水補(bǔ)足。

加入 750 μL 裂解液 LB，反復(fù)吹打，并劇烈振蕩混勻。

室溫靜置 5 min。

加入 200 μL 氯仿（自備），劇烈振蕩 15 sec 混勻。

室溫靜置 2 min。

4℃ 12,000rpm  離心 10 min，使樣品分層。取上層水相轉(zhuǎn)移至 1.5 mL 的 RNase-free 離心管中。

【注】：樣品會分為三層，下層為有機(jī)相，中間層和上層無色的水相，RNA 存在于上層水相中。

【注】：上層容量約為所加裂解液 LB 總量的 70%。如加入 750 μL 裂解液 LB，上層水相約為 525 μL。建議吸取 500 μL， 以防吸到中間層造成 DNA 污染。

加入 0.5 倍體積無水乙醇（自備），顛倒混勻。

【注】：出現(xiàn)沉淀屬正?，F(xiàn)象。

二、RNA 提?。?/span>

將 RNA 吸附柱 B3 套入 2 mL 收集管中，備用。

將上述的預(yù)處理混合液加入到 RNA 吸附柱 B3 中，12,000 rpm 離心 1 min，棄掉廢液。

加入 500 μL 去蛋白液 PL，12,000 rpm 離心 30 sec，棄廢液。

將 RNA 吸附柱 B3 放回收集管，加入 500 µL 漂洗液 W*，12,000 rpm 室溫離心 30 sec，棄廢液。

【注】：確保漂洗液 W*已添加無水乙醇。

重復(fù)一遍步驟 4。

將 RNA 吸附柱 B3 放回收集管，空柱 12,000 rpm 室溫離心 2 min，以除去殘留的漂洗液 W*。

將 RNA 吸附柱 B3 放入新的 1.5 mL RNase-free 離心管中，在 RNA 吸附柱 B3 中央加入 30-50 µL RNase-free H2O，室溫放置 2 min。然后 12,000 rpm 離心 1 min。收集濾液，即為 RNA 溶液。

【注】：可通過以下方式提高回收產(chǎn)量：①65℃預(yù)熱 RNase-free H2O；②將 RNA 濾液再次上柱，室溫放置 2 min 后，洗脫。

RNA 溶液可置于-80℃長期保存。

 

HB220112