產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
2×Hieff UNICON® HotStart PCR Master Mix (No Dye)是即用型的PCR預(yù)混合溶液，含有Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase，dNTP以及優(yōu)化的緩沖體系，只需加入引物和模板即可進(jìn)行擴(kuò)增，大大簡化了實(shí)驗(yàn)的操作步驟，可以高通量操作并提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性。Hieff UNICON® HotStart DNA Polymerase 的激活時間只需要2-3 min，兼容現(xiàn)有的 PCR 程序。本產(chǎn)品防止了在樣品準(zhǔn)備階段產(chǎn)生非特異擴(kuò)增，可以有效地進(jìn)行基因克隆和分型實(shí)驗(yàn)。PCR產(chǎn)物具有3’-dA突出端，可輕松克隆至T載體。預(yù)混液中不含染料。
產(chǎn)品應(yīng)用
低拷貝基因擴(kuò)增、基因型鑒定、菌落PCR
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，有效期2年。
注意事項(xiàng)
1）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
2）本產(chǎn)品僅作科研用途！
PCR反應(yīng)體系（50 μL）
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組分 |
體積 |
終濃度 |
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ddH2O |
to 50 μL |
- |
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模板DNA |
適量 |
- |
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Primer正向 (10 μM) |
2 μL |
0.4 μM |
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Primer反向 (10 μM) |
2 μL |
0.4 μM |
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2×Hieff UNICON® HotStart PCR Master Mix（No Dye） |
25 μL |
1× |
【注】：針對不同模板的最佳反應(yīng)濃度有所不同，下表為50 μL反應(yīng)體系推薦模板使用量，僅供參考。
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模板種類 |
模板使用量 |
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基因組DNA |
50 ng-200 ng |
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質(zhì)粒DNA |
100 pg-20 ng |
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cDNA |
1-5 μL (不超過反應(yīng)體系的1/10) |
PCR擴(kuò)增程序
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
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預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
1 |
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變性 |
95℃ |
30 sec |
35 |
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退火 |
50-60℃ |
30 sec |
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延伸 |
72℃ |
30 sec/kb |
|
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終延伸 |
72℃ |
10 min |
1 |
【注】：1）退火溫度和時間：溫度推薦使用50-60℃。退火溫度過低會導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。引物設(shè)計參考熒光定量引物標(biāo)準(zhǔn)。推薦退火時間設(shè)置為30 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時間太長可能導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度和時間。
2）延伸溫度和時間：溫度推薦使用72℃。時間推薦使用30 sec/kb。
3）擴(kuò)增產(chǎn)物：請將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物放置于-20℃保存，防止DNA發(fā)生降解。
相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
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10732ES03 |
1 mL |
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10732ES08 |
5×1 mL |
HB210831
