產品簡介

Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (UDG plus)是2×Mix預混合試劑，能夠實現在單個反應孔中進行多達四重的熒光定量PCR反應。本產品含有基因改造的抗體法熱啟動Taq酶，極大地提高了擴增靈敏度和特異性。同時，本產品對多重反應緩沖體系進行了深度優(yōu)化，能夠提高反應的擴增效率，促進低濃度模板的有效擴增。本產品可用于基因分型和基因多重定量分析。本產品含有UDG酶，可有效防止氣溶膠污染的風險。

 

產品信息

貨號	11212ES03/ 11212ES08 / 11212ES10/ 11212ES12 / 11212ES13/ 11212ES60/ 11212ES62
規(guī)格	1 mL /5×1 mL /10 mL /12.5 mL /1×12.5 mL /20×5 mL /125 mL

 

組分信息

組分編號	組分名稱	11212ES03	11212ES08	11212ES10	11212ES12	11212ES13	11212ES60	11212ES62
11212	2×TaqMan qPCR Mix	1 mL	5×1 mL	10 mL	12.5 mL	1×12.5 mL	20×5 mL	125 mL

 

儲存條件

-25~-15℃保存，有效期18個月。

 

使用說明

1. 反應體系******

組分	體積（μL）	終濃度
2×TaqMan qPCR Mix	12.5	1×
Primer Mix (10 μM)	x	0.1-0.5 μM*
Probe Mix (10 μM)	x	50-250 nM**
Rox reference dye***	0.5	1×
模板****	1-10	-
ddH2O	up to 25*****	-

*引物濃度：Primer Mix中包含多對引物，通常每條引物終濃度為0.2 μM，也可以根據情況在0.1-0.5 μM間進行調整。

**探針濃度：Probe Mix中包含多條不同熒光信號的探針，每條探針的濃度可根據具體情況在50-250 nM間調整。

***Rox reference dye：使用在Applied Biosystems 等Real Time PCR 擴增儀上，用以校正孔與孔之間產生的熒光信號誤差；本產品不含Rox reference dye。如需，推薦使用貨號10200ES產品。

****模板稀釋：qPCR靈敏度極高，建議將模板進行稀釋使用。若模板為cDNA原液，則模板體積不超過總體積的1/10。

*****反應體系：推薦使用25 μL、30 μL或50 μL，以保證目的基因擴增的有效性和重復性。

******體系配制：請于超凈工作臺內配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應管；推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。使用前務必充分混勻，避免劇烈震蕩產生過多氣泡。

2. 參考擴增程序

步驟	溫度	時間	循環(huán)數
污染消化	25℃	10 min	1
預變性	95℃	5 min	1
變性	95℃	15 sec	45
退火/延伸*	60℃	30 sec**

*退火/延伸：溫度和時間可根據實驗要求適當調整。

3. 適用機型

Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex;

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

Stratagene: MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR;SLAN:SLAN-96S,SLAN-96P.  

 

注意事項

1. 關于操作

1）請于使用前確保產品完全解凍并徹底混勻，短暫離心收集至管底后，置于冰上備用。

2）為避免樣品間交叉污染和氣溶膠污染，推薦在超凈臺中進行反應體系的配制。

3）使用過程中避免產品的反復凍融。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2. 實驗方法

1）引物設計

a. 引物必須具有特異性。

b. 引物的Tm值必須在58-60°C，而且各組引物的Tm差異應控制在1-2°C。

c. 引物的長度一般控制在15-30 bp之間。

2）探針設計

a. TaqMan探針的Tm值要比對應的引物高約10°C（68-70°C）。

b. TaqMan探針和引物間不能形成二聚體。

 

Ver.CN20240628