耐抑制Hieff Unicon? V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit
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產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit 是以 RNA 為模板進(jìn)行多重定量 PCR 反應(yīng)的試劑盒。在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，逆轉(zhuǎn)錄和定量 PCR 在同一反應(yīng)管中進(jìn)行，簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作，降低了污染的風(fēng)險(xiǎn)。
本試劑盒利用耐熱Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一鏈cDNA，并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase 進(jìn)行定量擴(kuò)增。本試劑盒主要包含優(yōu)化的 MP Buffer，Enzymes Mix 等，緩沖液中已含有 Mg2+和 dNTP 等，并添加了有效抑制非特異性 PCR 擴(kuò)增的因子和提升多重 qPCR 反應(yīng)擴(kuò)增效率的因子，能夠在保證引物擴(kuò)增效率的同時(shí)，進(jìn)行多達(dá)四重的反應(yīng)。
產(chǎn)品信息
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貨號(hào) |
11213ES60 / 11213ES76 / 11213ES80 / 11213ES92 |
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規(guī)格 |
100 T / 500 T / 1000 T / 10000 T |
組分信息
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組分編號(hào) |
組分名稱(chēng) |
11213ES60 (100 T) |
11213ES76 (500 T) |
11213ES80 (1000 T) |
11213ES92 (10000 T) |
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11213-A |
2×HU MP Buffer |
1.25 mL |
6.25 mL |
12.5 mL |
125 mL |
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11213-B |
HU Enzyme Mix |
100 μL |
500 μL |
1 mL |
10 mL |
【注】1. 2×HU® MP Buffer 為 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的簡(jiǎn)寫(xiě)。
- HU® Enzyme Mix 主要包含有耐熱 Hifair® V Reverse Transcriptase 和 UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。
儲(chǔ)存條件
-25~-15℃保存，有效期18個(gè)月。
使用說(shuō)明
- 反應(yīng)體系（以25 μL為例）
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組分 |
體積（μL） |
終濃度 |
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2×HU® MP Buffer |
12.5 |
1× |
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HU® Enzyme Mix |
1 |
- |
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Primer Mix (10 μM) |
各1 |
0.4 μM |
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Probe Mix (10 μM) |
各0.5 |
0.2 μM |
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模板RNA |
1-10 |
- |
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RNase Free H2O |
to 25 |
- |
【注】使用前務(wù)必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過(guò)多氣泡。
1. 引物濃度：Primer Mix 中包含多對(duì)引物，可以根據(jù)情況在 0.1-1.0 μM 間進(jìn)行調(diào)整。
2. 探針濃度：Probe Mix中包含多條不同熒光信號(hào)的探針，每條探針的濃度可根據(jù)具體情況在50-300 nM間調(diào)整。。
3. 模板稀釋?zhuān)?/font>qPCR靈敏度極高，建議將模板進(jìn)行稀釋使用，控制Ct值在20-35之間適宜。
4. 反應(yīng)體系：推薦使用 25-50 μL，以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性。
5. 體系配制：請(qǐng)于超凈工作臺(tái)內(nèi)配制，并使用無(wú)核酸酶殘留的槍頭、反應(yīng)管；推薦使用帶濾芯的槍頭；避免交叉污染和氣溶膠污染。
- 參考擴(kuò)增程序
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時(shí)間 |
循環(huán)數(shù) |
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逆轉(zhuǎn)錄 |
50℃a |
10 min |
1 |
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預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
1 |
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擴(kuò)增反應(yīng) |
95℃ |
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45 |
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60℃b |
30 secc |
【注】a. 逆轉(zhuǎn)錄：42℃或者50℃均可。
b. 擴(kuò)增反應(yīng)：擴(kuò)增反應(yīng)溫度根據(jù)設(shè)計(jì)的引物Tm值進(jìn)行調(diào)整。
c. 熒光信號(hào)采集：不同的qPCR檢測(cè)儀器所需的熒光信號(hào)采集時(shí)間不同，請(qǐng)根據(jù)最短時(shí)間限制進(jìn)行設(shè)置。
- 適用機(jī)型
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；
Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR
注意事項(xiàng)
1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)使用RNase free耗材。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20230731
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