產(chǎn)品描述

 

本試劑盒中的2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)是即用型的PCR預混合溶液，含有熱啟動Taq DNA Polymerase，dNTP以及優(yōu)化的緩沖體系，只需加入引物和模板即可進行擴增，大大簡化了實驗的操作步驟，可以高通量操作并提高實驗結(jié)果的重現(xiàn)性。本試劑盒中的PCR Enhancer是一種由多種成分組成的混合添加劑，在PCR反應中，PCR Enhancer能夠有效降低高GC模板和具有復雜二級結(jié)構(gòu)模板的解鏈溫度，極大地減少DNA二級結(jié)構(gòu)對PCR的影響，增加PCR反應的靈敏度和特異性，且兼容幾乎所有DNA聚合酶的擴增體系。本試劑盒主要應用于動物基因型鑒定，建議搭配動物組織裂解組分（Cat NO.19698ES）一起使用，效果更佳。

 

產(chǎn)品組分

 

編號	組分	產(chǎn)品編號/規(guī)格
		10170ES50（50 T）	10170ES70（200 T）
10170-A	2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)	500 μL	2 ×1 mL
10170-B	5 × PCR Enhancer	200 μL	800 μL

b）2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye) 包含 PCR 擴增所需要的熱啟動 Taq DNA 聚合酶、dNTP 和 Mg2+等；已混有溴酚藍染料作為電泳指示劑， PCR 產(chǎn)物可以直接進行電泳。

c）5 × PCR Enhancer ：高GC含量擴增（如大于65%）時，建議使用5 × PCR Enhancer。

 

運輸與保存

 

冰袋運輸。-20℃保存，有效期1年。

 

PCR反應體系

 

組分	體積（μL）	終濃度
2× Tissue Direct PCR Mix（With Dye）	10	1 ×
Forward Primer（10 μM）	0.5	0.25 μM
Reverse Primer（10 μM）	0.5	0.25 μM
裂解產(chǎn)物（DNA模板）	2	-
無菌超純水	To 20	-

【注】：各組分使用前應充分混勻。

a）模板使用量：建議總體系的5-20%之間，避免超過總體系的20%。

b）引物終濃度：反應性能較差時，推薦在 0.1- 0.5 μM 范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。

c）反應體系：推薦使用 20 μL，以保證目的基因擴增的有效性和重復性。

d）體系配制：配制好PCR反應體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時離心將反應液集于管底。

e）對照反應：建議進行PCR時，設置陽性和陰性PCR對照反應以便于排除假陽性或假陰性的干擾。

 

PCR反應條件

 

循環(huán)步驟	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
預變性	94℃	5 min	1
變性	94℃	10 sec	35
退火*	60℃	20 sec
延伸	72℃	20 sec
終延伸	72℃	5 min	1

*退火溫度：請參考引物的理論 Tm 值，退火溫度可設置低于引物理論值5℃，或通過梯度 PCR 確定最佳溫度。  

 

注意事項：

 

1. 建議使用新鮮采取的動物組織，若為長期冷凍組織，應盡量避免反復凍融，否則會導致模板的降解，影響 PCR 效率。

2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服、佩戴口罩、眼罩、一次性手套等采取防護性措施進行實驗操作。
3. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

HB210811