產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻
Hieff Unicon® Lyo Multiplex One Step RT-qPCR Kit是以RNA為模板進行多重定量PCR反應(yīng)的試劑盒，已經(jīng)添加了凍干保護劑，可用于凍干。
產(chǎn)品組分
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組分編號 |
組分名稱 |
13667ES60 (100 T) |
13667ES80 (1000 T) |
13667ES92 (10000 T) |
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13667-A |
4×Hifair® V Lyo-Buffer |
600 μL |
6 mL |
60 mL |
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13667-B |
MgCl2（25 mM） |
500 μL |
5 mL |
50 mL |
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13667-C |
10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix |
10 μL |
100 μL |
1 mL |
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13667-D |
凍干保護劑 |
700 μL |
7 mL |
70 mL |
【注】10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix主要包含有耐熱Hifair® V Reverse Transcriptase和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。
運輸與保存方式
1.運輸方式：冰袋運輸。
2.保存方式：Part 1：13667-A【4×Hifair® V Lyo-Buffer】-20℃保存，有效期1年。
13667-D【凍干保護劑】-20℃保存，有效期1年。
Part 2：13667-B【MgCl2（25 mM）】 4℃保存，有效期3年。
13667-C【10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix】4℃保存，有效期6個月。
3.本品避免反復(fù)凍融。建議分裝保存。
反應(yīng)體系
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組分 |
體積（μL） |
終濃度 |
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4×Hifair® V Lyo-Buffer |
6 |
1× |
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Hifair® V Lyo-Enzyme Mix |
0.1 |
- |
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MgCl2 (25 mM) |
2.5 |
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凍干保護劑 |
7 μL |
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Primer Mix (10 μM) |
各0.4 |
0.2 μM |
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Probe Mix (10 μM) |
各0.2 |
0.1 μM |
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模板 RNA |
1-5 μL |
- |
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RNase Free H2O |
to 25 μL |
- |
【注】：使用前務(wù)必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。
a) 引物濃度：Primer Mix中包含多對引物，通常每條引物終濃度為0.2 μM，也可以根據(jù)情況在0.1-1.0 μM間進行調(diào)整。
b) 探針濃度：Probe Mix中包含多條不同熒光信號的探針，每條探針的濃度可根據(jù)具體情況在50-300 nM間調(diào)整。
c) 模板稀釋：qPCR靈敏度極高，建議將模板進行稀釋使用，控制Ct值在20-35之間適宜。
d) 反應(yīng)體系：推薦使用25 μL或50 μL，以保證目的基因擴增的有效性和重復(fù)性。
e) 體系配制：請于超凈工作臺內(nèi)配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應(yīng)管；推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。
參考擴增程序
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反應(yīng)階段 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
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1 |
逆轉(zhuǎn)錄 |
50℃a |
10 min |
1 |
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2 |
預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
1 |
|
3 |
擴增反應(yīng) |
95℃ |
15 sec |
45 |
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60℃b |
30 secc |
【注】
a) 逆轉(zhuǎn)錄：42℃或者50℃均可，時間 10-15 min。
b) 擴增反應(yīng)：擴增反應(yīng)溫度根據(jù)設(shè)計的引物Tm值進行調(diào)整。CDC官方推薦的ORF1ab和N引物，退火溫度建議≥60℃。
c) 熒光信號采集：不同的qPCR檢測儀器所需的熒光信號采集時間不同，請根據(jù)最短時間限制進行設(shè)置。
注意事項
1.輔料配方發(fā)生微量的變化，需重新測定凍干參數(shù)，并做相應(yīng)調(diào)整。
2.凍干設(shè)備要求：
冷阱盤管表面溫度≤-60℃
板層溫度≤-45℃，溫度均一性±1℃（性能詳細說明及驗證方案咨詢翌圣生物技術(shù)人員）
可做壓升測試（凍干生產(chǎn)前，做泄漏率測試）
3.環(huán)境要求：
溶液分裝及配置盡量在萬級層流保護下進行，環(huán)境空間塵埃掉落進溶液中成為凍干過程的晶核，影響溶液的結(jié)晶的過冷度，導(dǎo)致產(chǎn)品質(zhì)量不一致性。
4.真空控制
摻氣方式：建議摻入氣體為高純氮氣
5.凍干試劑 MIX 工藝參數(shù)設(shè)定參考（凍干設(shè)備升華效率≥1mm/小時）
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溫度 |
斜率時間 |
時間 |
真空 Pa |
備注 |
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預(yù)凍 |
1 |
-45℃ |
—— |
2 h |
—— |
常溫最快速率降溫 |
|
2 |
-45℃ |
—— |
—— |
保持，根據(jù)包材驗證保持時間 |
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|
真空 |
3 |
-45℃ |
—— |
15 |
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|
升華階段 |
4 |
-40℃ |
10 h |
15 |
無斜率控制型凍干機，可分6個階段升溫 |
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|
5 |
0℃ |
2 h |
0 h |
15 |
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|
6 |
25℃ |
2 h |
4 h |
15 |
無斜率控制型凍干機，可分6個階段升溫 |
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解析干燥 |
7 |
30℃ |
2 h |
0 |
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含水量控制 |
8 |
壓升測試重試時間：30 min |
壓升測試：2 min<5 Pa |
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6.實驗過程中請使用RNase free耗材。
7.為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
8.本產(chǎn)品僅作科研用途！
相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
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10×Hieff Unicon® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl2) |
13168ES60 |
100 T |
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13168ES80 |
1000 T |
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13168ES92 |
10000 T |
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11301ES12 |
12 KU |
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11301ES75 |
300 KU |
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10724ES01 |
100 μL |
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10724ES94 |
1 mL |
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10724ES95 |
25 mL |
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|
10724ES96 |
100 mL |
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|
10701ES05 |
2 KU |
|
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10701ES10 |
10 KU |
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10701ES20 |
20 KU |
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10701ES60 |
100 KU |
HB210715
