產品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻
Hieff ® Smearase 是針對高通量測序平臺設計的新一代酶切試劑。本品采用高質量的片段化酶，酶切效果穩(wěn)定，偏好性 低，可有效降低片段化的時間和成本，擺脫了繁瑣的超聲步驟，讓片段化過程變得更加簡單高效。
產品信息
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貨號 |
12907ES08 / 12907ES24 /12907ES96/12907ES98 |
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規(guī)格 |
8 T /24 T /96 T/5000 T |
組分信息
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組分編號 |
組分名稱 |
12907ES08 |
12907ES24 |
12907ES96 |
12907ES98 |
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12907 |
Hieff ® Smearase |
80 μL |
240 μL |
960 μL |
50 mL |
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期18個月。
注意事項
1. 本試劑盒兼容范圍為 1 ng – 1 μg Input DNA。應盡可能使用 A260/A280 = 1.8-2.0 的高質量 Input DNA。
2. 若 Input DNA 中引入高濃度金屬離子螯合劑或其他鹽，可能會影響后續(xù)實驗，建議將 DNA 稀釋在 ddH2O 或不含 EDTA的 10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中進行片段化，EDTA 耐受范圍為 0-2 mM。
3. 對于常規(guī)的高質量基因組 DNA，酶切時間參考表 1。本試劑盒片段化偏好低，耐受各種 GC 含量的模板。
表 1 常規(guī)基因組 DNA片段化時間推薦表
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插入片段主峰大小 |
片段化時間 |
優(yōu)化范圍 |
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600 bp |
5 min |
3-10 min |
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400 bp |
10 min |
8-15 min |
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250 bp |
15 min |
10-20 min |
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200 bp |
20 min |
12-25 min |
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150 bp |
25 min |
20-30 min |
【注】：以上為推薦時間，需客戶在自己的實驗體系中進行微調，以達到最佳效果。
4. 參考表 1 片段化時間可將 DNA 酶切為所需大小，為保證優(yōu)質穩(wěn)定的片段化效果，片段化過程請于冰上操作。
5. 該酶在高溫條件下即可失活。
6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
7. 本產品僅用作科研用途！
使用方法
DNA 片段化（DNA Fragment）
該步驟將基因組 DNA 片段化。
1. 將表 2 中試劑解凍后，顛倒混勻，置于冰上備用。
2. 于冰上配制表 2 反應體系。
表 2 DNA 片段化PCR反應體系
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名稱 |
體積（μL） |
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Input DNA |
x |
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Hieff ® Smearase |
10 |
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ddH2O |
Up to 60 |
3. 使用移液器輕輕吹打或振蕩混勻，并短暫離心將反應液離心至管底。
4. 將上述 PCR 管置于 PCR 儀，設置表 3 所示反應程序，進行 DNA 片段化反應。
表 3 DNA 片段化PCR反應程序
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溫度 |
時間 |
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熱蓋 105°C |
On |
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4 °C |
1 min* |
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30 °C |
3-30 min** |
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72 °C |
10 min |
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4 °C |
Hold |
【注】：*DNA 片段化過程為有效控制片段化效果，避免過度酶切，反應程序可預先設置 4℃，待模塊溫度降至 4℃時，將 PCR 管放入 PCR 儀即可。
**對于完整的基因組 DNA，酶切時間參考表 1。
5. 產物如需純化，可使用 Hieff NGS® DNA Selection Beads（Cat#12601）或 AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效產品。
參考實例
使用 Hieff ® Smearase 對 Human gDNA 樣本進行酶切，片段化結果見圖 1。
圖 1 Hieff ® Smearase 酶切 200 ng Human gDNA 樣本（不同酶切時間片段化效果檢測）
Ver.CN20240617
