MolPure? Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit 磁珠法殘留DNA樣本前處理試劑盒(瓶裝)
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產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit適用于生物制品樣本中殘留DNA檢測(cè)的前處理。采用獨(dú)特的磁珠和精心優(yōu)化的緩沖體系，可最大限度的分離純化樣本中的微量宿主細(xì)胞殘留DNA。
該前處理試劑盒可與本公司的多種宿主細(xì)胞DNA殘留（qPCR法）檢測(cè)試劑盒配合使用，包括CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)試劑盒（Cat#41301ES）、HEK293宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)試劑盒（Cat#41302ES）、Vero宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)試劑盒（Cat#41303ES）和E.coli殘留DNA檢測(cè)試劑盒（Cat#41304ES）。
產(chǎn)品組分
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類別 |
組分編號(hào) |
組分名稱 |
產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 |
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18461ES25 （25 T） |
18461ES60 （100 T） |
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Part I |
18461-A |
蛋白酶K（20 mg/mL） |
0.5 mL/支×1支 |
1 mL/支×2支 |
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Part Ⅱ |
18461-B |
磁珠懸浮液 |
0.5 mL/支×1支 |
1 mL/支×2支 |
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18461-C |
裂解液 |
2.5 mL/瓶×1瓶 |
10 mL/瓶×1瓶 |
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18461-D |
結(jié)合液 |
10 mL/瓶×1瓶 |
40 mL/瓶×1瓶 |
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18461-E |
洗滌液A* |
6 mL/瓶×1瓶 （需加9 mL乙醇） |
24 mL/瓶×1瓶 （需加36 mL乙醇） |
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18461-F |
洗滌液B* |
3 mL/瓶×1瓶 （需加12 mL乙醇） |
12 mL/瓶×1瓶 （需加48 mL乙醇） |
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18461-G |
洗脫液 |
2.5 mL/瓶×1瓶 |
10 mL/瓶×1瓶 |
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Part Ⅲ |
18461-H |
糖原 |
225 μL/支×1支 |
900 μL/支×1支 |
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18461-I |
Poly A鉀鹽 |
150 μL/支×1支 |
600 μL/支×1支 |
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運(yùn)輸和保存方法
1. Part I組分冰袋運(yùn)輸，4℃可保存1年，長(zhǎng)期保存于-20℃。
2. Part II組分室溫運(yùn)輸，室溫保存，有效期1年。
3. Part Ⅲ組分干冰運(yùn)輸，-20℃保存1年。
4. 收到貨后，請(qǐng)檢查Part I、Part II和Part Ⅲ共3個(gè)組分是否齊全，并立即放入對(duì)應(yīng)的保存溫度中儲(chǔ)存。
注意事項(xiàng)
1. 使用前請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀使用說(shuō)明書(shū)，嚴(yán)格按照使用說(shuō)明書(shū)操作，樣本處理建議在超凈臺(tái)或生物安全柜中進(jìn)行。
2. 注意觀察常溫保存溶液是否有析出或渾濁（尤其冬季室溫為低溫環(huán)境時(shí)），可37℃水浴至溶液澄清，避免影響使用效果。
3. 洗脫時(shí)可能存在磁珠殘留，吸取樣本時(shí)應(yīng)盡量避免吸入磁珠。
4. 處理樣本及加樣時(shí)，勤換槍頭，避免交叉污染。
5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
6. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
1. 自備設(shè)備：漩渦振蕩器、水浴鍋或金屬浴、離心機(jī)、磁性分離架、杭州奧盛Auto-Pure32A自動(dòng)化核酸提取儀或其他品牌全自動(dòng)化核酸提取儀。
2. 自備耗材：10μL-1000μL不等的低吸附帶濾芯槍頭、1.5 mL低吸附離心管、PCR 8連管或96孔板及相應(yīng)的管蓋或覆膜。
3. 自備試劑：無(wú)水乙醇（分析純）、1×PBS緩沖液（pH 7.4，無(wú) Mg 和 Ca 離子）、超純水。
【注】：推薦您購(gòu)買(mǎi)本公司的超純水（Cat#10116ES）。
4. 首次使用時(shí)，需在洗滌液A*和洗滌液B*瓶中加入標(biāo)簽或說(shuō)明書(shū)中注明體積的無(wú)水乙醇，充分混勻后使用，并做好標(biāo)記。每次使用后將瓶蓋蓋緊，以保持瓶中的乙醇含量。
一、手工提取操作方法
1. 樣本處理
1.1 待測(cè)樣本為疫苗等本身含有較高的DNA含量的樣本，可用1×PBS（pH7.4，無(wú)Ca和Mg）對(duì)樣本進(jìn)行適當(dāng)比例稀釋后提取（對(duì)樣本進(jìn)行稀釋是為了保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性，使樣本的檢測(cè)值在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍之內(nèi)，通?？煽紤]進(jìn)行100倍稀釋）。
1.2 待測(cè)樣本為干粉的，可用超純水將樣本稀釋成10 mg/mL或者100 mg/mL后使用。
1.3 待測(cè)樣本為復(fù)雜背景基質(zhì)的，可根據(jù)需要進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，以確定合適的樣本稀釋倍數(shù)。
2. 取100 μL樣本裝于1.5 mL離心管中，加入100 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，渦旋混勻10 sec。
【注】：樣本蛋白濃度0-100 mg/mL，蛋白酶K用量為10 μL；樣本蛋白濃度100-200 mg/mL，蛋白酶K用量為20 μL。
3. 60℃孵育20 min。
4. 孵育完成后，加入400 μL結(jié)合液、9 μL糖原和6 μL Poly A鉀鹽渦旋混勻。
5. 加入20 μL磁珠，渦旋混勻后，放置10 min，每隔3 min渦旋混勻10 sec。
【注】：磁珠使用前需渦旋混勻，保證磁珠徹底重懸。在一次性加樣4-5次后，建議再次混勻后再行加樣。
6. 短暫離心后，將離心管置于磁力架上靜置1-2 min，待磁珠完全吸附，小心吸出液體。
7. 加入500 μL洗滌液A（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），振蕩或渦旋混勻，確保磁珠分散，離心管壁無(wú)聚集磁珠。
8. 短暫離心后，將離心管置于磁力架上靜置1-2 min，待磁珠完全吸附，小心吸取液體。
9. 加入500 μL洗滌液B（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），振蕩或渦旋混勻，確保磁珠分散，離心管壁無(wú)聚集磁珠。
10. 短暫離心后，將離心管置于磁力架上靜置1-2 min，待磁珠完全吸附，小心吸取液體。
11. 為保證盡量吸出殘留液體，可將離心管快速離心10 sec后，置于磁力架上用10 μL移液器吸出殘留液體。
12. 打開(kāi)管蓋，室溫放置3 min直至乙醇完全揮發(fā)。觀察到磁珠表面無(wú)反光或出現(xiàn)裂隙即表明乙醇已揮發(fā)完全。
13. 將離心管從磁力架上取下，加入50-100 μL 65℃預(yù)熱的洗脫液，振蕩混勻，短暫離心后，65℃孵育5 min，期間可振蕩混勻1次。
14. 短暫離心后，將離心管放置于磁力架上靜置2 min，待磁珠完全吸附，小心將DNA溶液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，保存于-20℃，長(zhǎng)期保存需放置于-80℃。
二、半自動(dòng)化提取操作方法
配套自動(dòng)化儀器使用，以杭州奧盛Auto-Pure32A自動(dòng)化核酸提取儀為例（如要配套其他主流品牌自動(dòng)化儀器使用，程序可向翌圣生物科技（上海）股份有限公司獲?。?/span>
1. 樣本處理
1.1 待測(cè)樣本為疫苗等本身含有較高的DNA含量的樣本，可用1×PBS（pH7.4，無(wú)Ca和Mg）對(duì)樣本進(jìn)行適當(dāng)比例稀釋后提取（對(duì)樣本進(jìn)行稀釋是為了保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性，使樣本的檢測(cè)值在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍之內(nèi)，通?？煽紤]進(jìn)行100倍稀釋）。
1.2 待測(cè)樣本為干粉的，可用超純水將樣本稀釋成10 mg/mL或者100 mg/mL后使用。
1.3 待測(cè)樣本為復(fù)雜背景基質(zhì)的，可根據(jù)需要進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，以確定合適的樣本稀釋倍數(shù)。
2. 取100 μL樣本裝于1.5 mL離心管中，加入100 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，渦旋混勻10 sec。
【注】：樣本蛋白濃度0-100 mg/mL，蛋白酶K用量為10 μL；樣本蛋白濃度100-200 mg/mL，蛋白酶K用量為20 μL。
3. 60℃孵育20 min，即為預(yù)處理樣本，待用。
4. 按照下表向96孔深孔板中加入相應(yīng)試劑（以杭州奧盛Auto-Pure32A核酸提取儀為例）：
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板的名稱 |
位置 |
試劑名稱 |
用量/孔 |
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樣品處理板 |
V1 |
預(yù)處理樣本 |
200 µL |
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結(jié)合液 |
400 µL |
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|
糖原 |
9 µL |
||
|
Poly A鉀鹽 |
6 µL |
||
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漂洗板 |
V2 |
洗滌液A* |
500 µL |
|
洗滌板/磁珠板 |
V3 |
磁珠懸浮液 |
20 µL |
|
洗滌液B* |
500 µL |
||
|
洗脫板 |
V6 |
洗脫液 |
50-100 µL |
【注】：磁珠懸浮液使用前需在渦旋混勻儀上充分重懸或充分顛倒混勻，在一次性加樣4-5次后，建議再次混勻后再行加樣。
5. 按照提取儀的位置，正確安放上述96孔預(yù)裝板，并放置96深孔磁棒套。
6. 運(yùn)行如下程序，程序結(jié)束后，將洗脫液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，溶液可置于-20℃短期保存，-80℃長(zhǎng)期保存。
奧盛Auto-Pure32A的提取儀器的提取程序
|
步驟 |
孔位 |
混合時(shí)間(min) |
吸磁時(shí)間(sec) |
等待時(shí)間(min) |
容積(μL) |
混合速度(1-10) |
溫度(℃) |
混合位置(0-100%) |
混合幅度(1-100%) |
吸磁位置(0-100%) |
吸磁速度(1-10) |
|
移磁珠 |
3 |
0.2 |
60 |
0 |
500 |
5 |
/ |
0 |
80 |
0 |
1 |
|
結(jié)合 |
1 |
15 |
90 |
0 |
600 |
5 |
/ |
0 |
80 |
0 |
1 |
|
清洗1 |
2 |
1 |
60 |
0 |
500 |
8 |
/ |
0 |
80 |
0 |
1 |
|
清洗2 |
3 |
1 |
60 |
4 |
500 |
8 |
/ |
0 |
80 |
0 |
1 |
|
洗脫 |
6 |
8 |
90 |
0 |
100 |
10 |
65 |
0 |
80 |
0 |
1 |
|
棄磁珠 |
3 |
0.2 |
0 |
0 |
500 |
5 |
/ |
0 |
80 |
0 |
1 |
HB220518
