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      Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit 細(xì)胞核/細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒
       
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      產(chǎn)品說明書
                  
      FAQ
                  
      COA
                  
      已發(fā)表文獻(xiàn)
                  
       
      產(chǎn)品描述
      


      細(xì)胞核蛋白、細(xì)胞漿蛋白在細(xì)胞研究和蛋白質(zhì)組學(xué)中具有重要意義，因此在體外研究中需要將其從細(xì)胞或組織中分離。本試劑盒提供了一種較為簡單方便，高效的蛋白抽提方法，其原理是：通過細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A和B，在低滲透壓條件下，使細(xì)胞充分膨脹，然后破壞細(xì)胞膜，釋放出細(xì)胞漿蛋白，然后通過離心得到細(xì)胞核沉淀。最后通過高鹽的細(xì)胞核蛋白抽提試劑C抽提得到細(xì)胞核蛋白。
      


      本試劑盒1次可對2×106個(gè)細(xì)胞和30-50 mg組織樣品進(jìn)行抽提，按照該使用量，20126ES50可抽提50個(gè)樣品，20126ES60可抽提100個(gè)樣品。
      


      翌圣為您提供Western Blot實(shí)驗(yàn)整體解決方案，相關(guān)產(chǎn)品選購請參考：WB實(shí)驗(yàn)系列產(chǎn)品-選購指南
      



      
產(chǎn)品組分
      


      
	
		
      
			
			
      組分編號
      
			      		
			
			
      組分名稱
      
			      		
			
			
      產(chǎn)品編號/規(guī)格
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      20126ES50（50T）
      
			      		
			
			
      20126ES60（100T）
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      20126-A
      
			      		
			
			
      Cytoplasmic Extraction Reagent A 胞漿蛋白抽提試劑A
      
			      		
			
			
      15 mL
      
			      		
			
			
      30 mL
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      20126-B
      
			      		
			
			
      Cytoplasmic Extraction Reagent B胞漿蛋白抽提試劑B
      
			      		
			
			
      0.5 mL
      
			      		
			
			
      1 mL
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      20126-C
      
			      		
			
			
      Nuclear Extraction Reagent 胞核蛋白抽提試劑
      
			      		
			
			
      2.5 mL
      
			      		
			
			
      5 mL
      
			      		
		
      
	      

      



      
運(yùn)輸和保存方法
      


      冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，1年有效。
      



      
注意事項(xiàng)
      


      1）客戶需自備PMSF。
      


      2）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
      


      3）本產(chǎn)品僅作科研用途！
      



      
使用方法
      


      將試劑盒各組分溶解后立即放置在冰上，混勻。取適量的胞漿蛋白抽提試劑A（以下統(tǒng)稱：試劑A）和胞核蛋白抽提試劑（以下統(tǒng)稱：試劑C）備用，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM。
      


      1 細(xì)胞樣品蛋白的抽提
      


      1）細(xì)胞處理
      


      對于貼壁細(xì)胞：PBS清洗細(xì)胞1次，EDTA溶液消化細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下細(xì)胞，并用移液器吹打下細(xì)胞。離心收集細(xì)胞，盡量吸盡上清，留下細(xì)胞沉淀備用。
      


      【注】：盡量避免用胰酶消化細(xì)胞，以免胰酶降解抽提的目的蛋白。
      


      對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，PBS清洗細(xì)胞1次，收集細(xì)胞，盡量吸盡上清，留細(xì)胞沉淀備用。
      


      2） 每20 µL細(xì)胞沉淀加入200 µL含PMSF的試劑A。
      


      【注】：對于2×106個(gè)Hela細(xì)胞，其細(xì)胞沉淀的體積大約為20 µL或40 mg。
      


      3） 最高速劇烈渦旋5 s，完全懸浮分散細(xì)胞沉淀。
      


      【注】：如果細(xì)胞沉淀沒有完全懸浮并分散開，可以適當(dāng)延長旋渦震蕩的時(shí)間。
      


      4） 冰浴10-15 min。
      


      5） 加入胞漿蛋白抽提試劑B（以下統(tǒng)稱：試劑B）10 µL。最高速劇烈渦旋5 s，冰浴1 min。
      


      6） 最高速劇渦旋5 s，4℃ 12,000-16,000 g離心5 min。
      


      7） 立即吸取上清至一預(yù)冷的塑料管中，上清即為抽提得到的細(xì)胞漿蛋白?？梢粤⒓词褂茫部梢詢龃?zhèn)溆谩?/span>
      


      【注】：此步千萬不要觸及沉淀，可以在沉淀上方保留極小體積的上清，以免吸到沉淀。
      


      8） 對于沉淀，完全吸盡殘余上清，加入50 µL含PMSF的試劑C。
      


      【注】：此步需完全吸盡上清，否則會帶來細(xì)胞漿蛋白的污染。
      


      9） 最高速劇烈渦旋15-30 s，把沉淀完全懸浮并分散開。然后放回冰浴中，每隔1-2 min再高速劇烈渦旋15-30 s，共30 min。10）4℃ 12,000-16,000 g離心10 min。
      


      11）立即吸取上清至一預(yù)冷的塑料管中，即為抽提得到的細(xì)胞核蛋白?？梢粤⒓词褂茫部梢?70℃凍存?zhèn)溆谩?/span>
      



      
2 組織樣品的抽提
      


      1）將組織切成非常細(xì)小的碎片。根據(jù)后續(xù)使用量按照20:1的比例混合試劑A和B，并加入PMSF至最終濃度為1 mM，混勻即可配制成組織勻漿液。按照每60 mg組織加入200 µL組織勻漿液的比例混合組織和組織勻漿液，并在玻璃勻漿器內(nèi)充分勻漿?！咀ⅰ浚簞驖{需在冰浴或4℃進(jìn)行。
      


      2）勻漿后將勻漿液轉(zhuǎn)移至塑料離心管內(nèi)，冰浴放置15 min。
      


      3）4℃ 1,500 g離心5 min。把上清轉(zhuǎn)移至一預(yù)冷的塑料管中，上清含部分細(xì)胞漿蛋白?！咀ⅰ浚何锨鍟r(shí)千萬不要觸及沉淀。
      


      4）對于上述收集得到的沉淀，已經(jīng)充分勻漿，但很多細(xì)胞仍沒有破碎。接下來請參照【細(xì)胞樣品蛋白抽提】的步驟2）開始操作，即把沉淀當(dāng)做已經(jīng)離心收集好的細(xì)胞沉淀操作，即可得到細(xì)胞漿蛋白和細(xì)胞核蛋白。抽提得到的細(xì)胞漿蛋白可以和步驟【組織樣品抽提】中步驟3）抽提得到的細(xì)胞漿蛋白合并備用。
      


       
      


      HB180913
      

         
       
       
       
       
       
       
       
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