產(chǎn)品說(shuō)明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
離子交換主要包括強(qiáng)陽(yáng)離子交換、弱陽(yáng)離子交換、強(qiáng)陰離子交換和弱陰離子交換4種，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的分離純化。
Q強(qiáng)陰離子交換層析填料HP以高度交聯(lián)的6%瓊脂糖為基架，可耐受較高的流速及更高的化學(xué)穩(wěn)定性，適合實(shí)驗(yàn)室及工業(yè)大規(guī)模純化。本品帶電基團(tuán)-N+(CH3)3。
本品Q強(qiáng)陰離子交換預(yù)裝柱是Q強(qiáng)陰離子交換層析填料HP的中壓預(yù)裝柱，規(guī)格為1 mL，該預(yù)裝柱具有標(biāo)準(zhǔn)接口，可以適配商品化的各類中壓色譜系統(tǒng)，如ÄKTA等，方便客戶操作。
產(chǎn)品性質(zhì)
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基質(zhì) |
高度交聯(lián)的6%瓊脂糖微球 |
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粒徑 |
24-45 µm |
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離子交換類型 |
強(qiáng)陰離子 |
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載量 |
～0.14-0.20 mmol Cl-/mL 基質(zhì) |
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耐壓 |
0.3 MPa |
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推薦使用流速 |
60~150cm/h |
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pH范圍 |
2-12（長(zhǎng)期）/ 2-14（短期） |
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儲(chǔ)存緩沖液 |
20%乙醇 |
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柱子尺寸 |
0.7×2.5 cm（1 mL） |
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。4-30℃保存，有效期2年。
使用方法
1 緩沖液的準(zhǔn)備
應(yīng)選擇緩沖基團(tuán)不與介質(zhì)作用的緩沖鹽，平衡緩沖液宜采用低鹽和低 pH（通常低于目的物等電點(diǎn) 1 個(gè) pH 單位）緩沖液以有利于目的物的結(jié)合，同時(shí)需要考慮目的物在緩沖液中的穩(wěn)定性。洗脫緩沖液通常為在平衡緩沖液中加入高濃度鹽（如 1M NaCl）的緩沖液或高 pH 洗脫。所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過(guò)濾。
表1：陰離子交換緩沖液
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pH 范圍 |
緩沖鹽 |
濃度（mM） |
平衡離子 |
pKa(25℃) |
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4.3-5.3 |
N-Methylpiperazine |
20 |
Cl- |
4.75 |
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4.8-5.8 |
Piperazine |
20 |
Cl-或HCOO- |
5.33 |
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5.5-6.5 |
L-Histidine |
20 |
Cl- |
6.04 |
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6.0-7.0 |
bis-Tris |
20 |
Cl- |
6.48 |
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6.2-7.2 |
bis-Tris propane |
20 |
Cl- |
6.65 |
|
7.3-8.3 |
Triethanolamine |
20 |
Cl-或CH3COO- |
7.76 |
|
7.6-8.6 |
Tris |
20 |
Cl- |
8.07 |
|
8.0-9.0 |
N-Methyl-diethanolamine |
20 |
SO42- |
8.52 |
|
8.0-9.0 |
N-Methyl-diethanolamine |
50 |
Cl-或CH3COO- |
8.52 |
|
8.4-9.4 |
Diethanolamine |
50 |
Cl- |
8.88 |
|
8.4-9.4 |
Propane 1,3-Diamino |
20 |
Cl- |
8.88 |
|
8.6-9.6 |
bis-Tris propane |
20 |
Cl- |
9.10 |
|
9.0-10.0 |
Ethanolamine |
20 |
Cl- |
9.50 |
|
9.2-10.2 |
Piperazine |
20 |
Cl- |
9.73 |
|
10.0-11.0 |
Propane 1,3-Diamino |
20 |
Cl- |
10.55 |
|
10.6-11.6 |
Piperidine |
20 |
Cl- |
11.12 |
2 樣品準(zhǔn)備
樣品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過(guò)濾，減少雜質(zhì)，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。
3 樣品純化
1）將泵管道中注滿去離子水。去掉上塞子，將層析柱連接至色譜系統(tǒng)中。再折斷下口，將預(yù)裝柱接到色譜系統(tǒng)中，并旋緊。
2）用3-5倍柱體積的去離子水沖洗出存儲(chǔ)緩沖液。
3）使用至少5倍柱床體積的結(jié)合Buffer平衡色譜柱。
4）利用泵或注射器上樣。
【注】樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少也會(huì)導(dǎo)致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過(guò)柱子的結(jié)合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進(jìn)樣器更難使用。
5）用洗雜Buffer沖洗柱子，直到紫外吸收達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的基線（一般至少10-15個(gè)柱體積）。
6）用洗脫Buffer采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫中，通常5倍柱體積洗脫液就足夠了?？梢杂靡粋€(gè)小的梯度，例如20倍柱體積或更多，來(lái)分離不同結(jié)合強(qiáng)度的蛋白質(zhì)。
5 填料清洗
離子交換填料每次使用后可以用1M NaCl甚至更高離子強(qiáng)度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱體積的Buffer進(jìn)行平衡至離子強(qiáng)度或pH值穩(wěn)定。
CIP（Cleaning In Place）清洗
離子交換填料可以重復(fù)使用而無(wú)需再生，但隨著非特異性結(jié)合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量都下降，這時(shí)可按照下面方法對(duì)填料進(jìn)行清洗。
1）去除一些沉淀或變性物質(zhì)
用2倍柱體積的1 M NaOH溶液進(jìn)行清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。
2）去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)
用3-4倍柱體積的70%乙醇或3-4倍柱體積的1% Triton™ X-100清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。
3）去除一些離子鍵結(jié)合物質(zhì)
用3-4倍柱體積的2 M NaCl清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH 7.4清洗。
注意事項(xiàng)
1）請(qǐng)勿冷凍保存本產(chǎn)品。
2）為了得到良好的分離效果，避免緩沖液與層析柱有太大溫差變化。
3）層析柱可以放在層析冷柜中使用，但是需要適當(dāng)降低流速。
4）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
5）本產(chǎn)品僅作科研用途！
附表 問(wèn)題及解決方案
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問(wèn)題 |
可能原因 |
推薦解決方案 |
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柱子反壓過(guò)高 |
填料被堵塞 |
按照【填料清洗】部分對(duì)填料進(jìn)行清洗。 |
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樣品中含有微小的固體顆粒，建議使用前用0.22 µm或0.45 µm濾膜過(guò)濾。 |
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洗脫樣品較雜 |
填料重復(fù)多次使用 |
按照【填料清洗】部分對(duì)填料進(jìn)行清洗或更換新填料。 |
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平衡不充分 |
增加平衡液體積，確保填料充分平衡/洗雜。 |
