疏水作用層析（hydrophobic interaction chromatography，HIC）是利用生物分子所帶有的疏水基團和固定相上的疏水配基之間的相互作用來分離物質(zhì)的一種層析方法，鹽離子可以破壞生物分子表面的水化膜，促進疏水基團和配基之間的結(jié)合。

本品Phenyl Agarose FF(LS)是一種高取代的芳香族疏水層析介質(zhì)，它是在 6%的瓊脂糖基架上偶聯(lián)苯基而成的，結(jié)合載量相對Phenyl Agarose FF(HS)較低，配基疏水性強，適合疏水性較弱的生物分子的分離純化。

 

產(chǎn)品性質(zhì)

基質(zhì)	6%的高度交聯(lián)的瓊脂糖
粒徑	45-165 µm
功能基團	苯基
載量	10 mg lgG 或 24 mg HSA/mL
建議流速	300-600 cm/h
pH范圍	3-13
儲存緩沖液	20%乙醇

 

運輸和保存方法

冰袋運輸。4-30℃保存，有效期4年。

 

注意事項

1）請勿冷凍保存本產(chǎn)品。

2）填料使用前一定要充分顛倒若干次，使瓊脂糖珠混合均勻。

3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

4）本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

使用方法

1 緩沖液的準備

1）所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾。

2）結(jié)合緩沖液通常選用含有高濃度鹽的磷酸鹽緩沖液，如20 mM PB，1.5 M (NH₄)₂SO₄，pH7.0。

3）洗脫緩沖液通常選用不含其他鹽類的磷酸鹽緩沖液，如50 mM PB，pH7.0，對于較難洗脫的物質(zhì)可以采用純水，或者在純水中加入低濃度乙醇作為洗脫液。

注：需要根據(jù)后續(xù)的實驗結(jié)果（目的物是否有沉淀、目的物的結(jié)合強弱、回收率、分離度等） 對結(jié)合緩沖液中的鹽的濃度和類型進行調(diào)整。

 

2 樣品準備

樣品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，減少雜質(zhì)，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。需要將樣品的 pH 和電導(dǎo)率調(diào)整到與結(jié)合緩沖液一致。

 

3 樣品純化

1）將介質(zhì)裝入合適的層析柱，用3-5倍柱體積的去離子水沖洗出儲存緩沖液，然后用5倍柱體積的結(jié)合Buffer進行平衡，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護蛋白的作用。

2）將樣品加到平衡好的Phenyl Agarose FF(LS)中，收集流出液。

3）用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進行清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。

4）使用5-10倍柱體積的洗脫Buffer，收集洗脫液，即目的蛋白組分。

5）依次使用3倍柱體積的結(jié)合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，最后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被細菌污染。

 

4 填料清洗

疏水層析填料每次使用后可以分別用2-3倍柱體積的30%異丙醇（70%乙醇）、3倍柱體積的純化水沖洗層析柱，然后用至少3倍柱體積的平衡液進行平衡。

CIP（Cleaning In Place）清洗

疏水層析填料可以重復(fù)使用，但隨著非特異性結(jié)合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量都下降，這時可按照下面方法對樹脂進行清洗。

1）先用2個柱體積的純化水沖洗掉結(jié)合比較緊的蛋白。

2）對于強疏水性蛋白、沉淀蛋白的去除：先用2~3個柱體積1M NaOH清洗，然后立即用5~10個柱體積純水沖洗。

3）脂蛋白和脂類物質(zhì)的去除：先用5~10個柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，后用5~10個柱體積純水沖洗。

4）也可將上述兩種清洗條件結(jié)合進行清洗，即用含有1M NaOH的30%異丙醇溶液清洗。

HB220815