產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

疏水作用層析（hydrophobic interaction chromatography，HIC）是利用生物分子所帶有的疏水基團(tuán)和固定相上的疏水配基之間的相互作用來(lái)分離物質(zhì)的一種層析方法，鹽離子可以破壞生物分子表面的水化膜，促進(jìn)疏水基團(tuán)和配基之間的結(jié)合。

Phenyl Agarose HP疏水介質(zhì)的基架為高度交聯(lián)的瓊脂糖，保留了天然多糖化合物極好的親水性及孔結(jié)構(gòu)，對(duì)生物大分子具有很好的相容性，Phenyl Agarose HP的平均粒徑為34 μm，與Phenyl Agarose FF(HS)（Cat#20480ES）、Phenyl Agarose FF(LS)（Cat#20482ES）相比具有較高的分辨效率，其表面含有疏水性配基，配基是苯基，特別適用于重組蛋白、抗體、疫苗、VLP 顆粒等疏水性強(qiáng)弱一般的生物分子的精細(xì)分離純化。

翌圣Phenyl Agarose HP儲(chǔ)存在20%乙醇中，凝膠和保護(hù)液的比例為2:1，我司產(chǎn)品規(guī)格為實(shí)際凝膠的體積。

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產(chǎn)品性質(zhì)

 

基質(zhì)	6%高度交聯(lián)的瓊脂糖
粒徑	25-45 µm
功能基團(tuán)	苯基
載量	25 mg lgG或20 mg BSA/mL
建議流速	≤150 cm/h
pH工作范圍	3-13
PH穩(wěn)定性	2-14（短時(shí)間，在位清洗）；4-13（長(zhǎng)時(shí)間）
化學(xué)穩(wěn)定性	常用的水相緩沖液；1 mol/L 氫氧化鈉；8 mol/L 尿素；6 mol/L 鹽酸胍 ；70% 乙醇
儲(chǔ)存緩沖液（Buffer）	20%乙醇

 

儲(chǔ)存條件

 

4~30℃保存，有效期4年。

 

使用說(shuō)明

 

1.     緩沖液的準(zhǔn)備

1）所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過(guò)濾。

2）結(jié)合緩沖液通常選用含有高濃度鹽的磷酸鹽緩沖液，如20 mM PB，1.5 M (NH₄)₂SO₄，pH7.0。

3）洗脫緩沖液通常選用不含其他鹽類(lèi)的磷酸鹽緩沖液，如50 mM PB，pH7.0，對(duì)于較難洗脫的物質(zhì)可以采用純水，或者在純水中加入低濃度乙醇作為洗脫液。

注：需要根據(jù)后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（目的物是否有沉淀、目的物的結(jié)合強(qiáng)弱、回收率、分離度等） 對(duì)結(jié)合緩沖液中的鹽的濃度和類(lèi)型進(jìn)行調(diào)整。

2.    樣品準(zhǔn)備

樣品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過(guò)濾，減少雜質(zhì)，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。需要將樣品的pH和電導(dǎo)率調(diào)整到與結(jié)合緩沖液一致。

3. 樣品純化

1）將介質(zhì)裝入合適的層析柱，用3-5倍柱體積的去離子水沖洗出儲(chǔ)存緩沖液，然后用5倍柱體積的結(jié)合Buffer進(jìn)行平衡，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護(hù)蛋白的作用。

2）將樣品加到平衡好的Butyl Agarose HP中，收集流出液。

3）用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進(jìn)行清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。

4）用5-10倍柱體積的洗脫Buffer，收集洗脫液，即目的蛋白組分。

5）依次使用3倍柱體積的結(jié)合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，最后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被細(xì)菌污染。

4. 填料清洗

疏水層析填料每次使用后可以分別用2-3倍柱體積的30%異丙醇（或70%乙醇）、3倍柱體積的純化水沖洗層析柱，然后用至少3倍柱體積的平衡液進(jìn)行平衡。

5.   CIP（Cleaning In Place）清洗

疏水層析填料可以重復(fù)使用，但隨著非特異性結(jié)合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量都下降，這時(shí)可按照下面方法對(duì)填料進(jìn)行清洗。

1）先用2個(gè)柱體積的純化水沖洗掉結(jié)合比較緊的蛋白。

2）對(duì)于強(qiáng)疏水性蛋白、沉淀蛋白的去除：先用2~3個(gè)柱體積1 M NaOH清洗，然后立即用5~10個(gè)柱體積純水沖洗。

3）脂蛋白和脂類(lèi)物質(zhì)的去除：先用5~10個(gè)柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，后用5~10個(gè)柱體積純水沖洗。

4）也可將上述兩種清洗條件結(jié)合進(jìn)行清洗，即用含有1M NaOH的30%異丙醇溶液清洗。

 

注意事項(xiàng)

 

1. 請(qǐng)勿冷凍保存本產(chǎn)品。

2. 填料使用前一定要充分顛倒若干次，使瓊脂糖珠混合均勻。

3. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20250212