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      MitoTracker? Red CMXRos 線粒體紅色熒光探針

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      產(chǎn)品說(shuō)明書

      FAQ

      COA

      已發(fā)表文獻(xiàn)

      產(chǎn)品描述

      MitoTracker® Red CMXRos是一種細(xì)胞滲透型的X-rosamine衍生物,包含標(biāo)記線粒體的弱巰基反應(yīng)性的氯甲基官能團(tuán)。本品是一種氧化型的紅色熒光染料(Ex=579 nm,Em=599 nm),只需簡(jiǎn)單孵育細(xì)胞,即可被動(dòng)運(yùn)輸穿過(guò)細(xì)胞膜并直接聚集在活性線粒體上。一旦線粒體被染色后,還能根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的需求進(jìn)行固定(醛類固定劑如甲醛)和透化(醛類去污劑如Triton X-100),探針依然維持在細(xì)胞內(nèi)。本品適合雙標(biāo)實(shí)驗(yàn),因其紅色熒光與其他的綠色熒光探針具有良好的分辨率。

      雖然傳統(tǒng)的線粒體熒光探針如TMR和羅丹明123,也能很容易的聚集在功能線粒體上,但是一旦線粒體膜電位喪失即會(huì)被洗掉,從而在一些需要細(xì)胞進(jìn)行醛類固定或者包含線粒體能量狀態(tài)影響因子的實(shí)驗(yàn)中,使其應(yīng)用大受限制。

       

      產(chǎn)品性質(zhì)

      CAS號(hào)(CAS NO.)

      167095-09-2

      分子式(Formula)

      C32H32Cl2N2O

      分子量(Molecular weight)

      531.52

      外觀(Appearance)

      紫色固體

      激發(fā)波長(zhǎng)(Ex)

      579 nm

      發(fā)射波長(zhǎng)(Em)

      599 nm

      結(jié)構(gòu)式(Structure)

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      運(yùn)輸和保存方法

      室溫運(yùn)輸;-20℃避光干燥保存,有效期1年。

       

      使用方法

      1. 儲(chǔ)存液的配制

      本品是以粉末形式提供,使用前需將本品回溫至室溫。

      之后使用細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別的無(wú)水DMSO(如Yeasen,貨號(hào):60313ES60)將其充分溶解至終濃度1 mM。

      本品M. Wt.= 531.52 g/mol,換算下來(lái),50 µg粉末只需加入94 µL DMSO即可得到1 mM儲(chǔ)存液。

      可根據(jù)單次的使用量將儲(chǔ)存液分裝后放到-20℃避光,避免反復(fù)凍融。

      2. 工作液的配制

      根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖褂貌煌奶结槤舛?,以下的起始操作條件僅作參考,可根據(jù)細(xì)胞類型和其他的相關(guān)因素如細(xì)胞或組織的透化等進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。

      用適當(dāng)?shù)木彌_液或者細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋1 mM儲(chǔ)存液至工作液濃度。一般推薦使用濃度為25-500 nM。對(duì)于后續(xù)需要做固定或透化的樣本,推薦工作濃度為100-500 nM,為了降低過(guò)度加載導(dǎo)致的潛在偽影和線粒體毒性,在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的前提下應(yīng)盡可能低濃度染色。另外,濃度過(guò)高也可能對(duì)其他細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行染色。

      3. 染色及檢測(cè)

      1)貼壁細(xì)胞的染色

      培養(yǎng)皿/板內(nèi)加入適量的培養(yǎng)基覆蓋蓋玻片進(jìn)行爬片培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)至所需豐度,吸除培養(yǎng)液,加入37℃預(yù)熱的MitoTracker® Red CMXRos染色工作液。在所使用細(xì)胞正常培養(yǎng)條件下孵育15-45 min(最佳孵育時(shí)間需優(yōu)化)。染色結(jié)束后,使用新鮮培養(yǎng)液或緩沖液替換上述染色液,即可將其置于熒光顯微鏡下觀察或熒光酶標(biāo)儀下讀數(shù)?;蛘哌M(jìn)行后續(xù)的固定和透化步驟,見步驟4。

      2)懸浮細(xì)胞的染色

      離心收集細(xì)胞,吸除上清,利用37℃預(yù)熱的MitoTracker® Red CMXRos染色工作液輕輕重懸細(xì)胞。在所使用細(xì)胞正常培養(yǎng)條件下孵育15-45 min(最佳孵育時(shí)間需優(yōu)化)。染色結(jié)束后,離心收集細(xì)胞,利用37℃預(yù)熱的新鮮培養(yǎng)液或緩沖液重懸細(xì)胞,被染色的細(xì)胞可用流式細(xì)胞儀、熒光酶標(biāo)儀、熒光顯微鏡進(jìn)行分析。

      如果需要蓋玻片上固定化的細(xì)胞,那么可在鋪片前先用多聚賴氨酸(poly-D-lysine)包被載玻片或蓋玻片。

      或者進(jìn)行后續(xù)的固定和透化步驟,見步驟4。

      4. 固定和透化

      1)染色結(jié)束后,利用培養(yǎng)液或緩沖液清洗細(xì)胞;

      2)小心吸走清洗液。換用新鮮配制且預(yù)熱的含2-4%甲醛的緩沖液或培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)胞固定。經(jīng)驗(yàn)證,本染料MitoTracker® Red CMXRos由含3.7%甲醛的完全培養(yǎng)液于37℃孵育內(nèi)皮細(xì)胞15 min能起到良好的固定效果。

      3)清洗細(xì)胞:吸除固定液,用適當(dāng)緩沖液沖洗細(xì)胞數(shù)次。

      4)細(xì)胞透化(可選):

      ICC等實(shí)驗(yàn)需要細(xì)胞要做透化,則可將已固定的細(xì)胞直接加入含有去污劑如Triton X-100的緩沖液中孵育。透化結(jié)束后,用緩沖液清洗細(xì)胞即可進(jìn)行后續(xù)ICC實(shí)驗(yàn)。經(jīng)檢測(cè),利用含0.2% Triton X-100的PBS孵育內(nèi)皮細(xì)胞10 min可以達(dá)到良好的透化效果。

      另外,還可利用預(yù)冷的丙酮透化5 min,之后用PBS清洗細(xì)胞。經(jīng)驗(yàn)證,即使后繼沒(méi)有進(jìn)一步的抗體標(biāo)記,丙酮透化處理也可降低背景信號(hào)。

       

      注意事項(xiàng)

      1DMSO有毒,使用時(shí)請(qǐng)小心操作。

      2)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

      3)本產(chǎn)品僅作科研用途!

       

      HB211230

      400-6111-883