UDG（尿嘧啶-DNA 糖基化酶）能催化水解含有尿嘧啶的DNA鏈的尿嘧啶堿基和糖磷酸骨架的N-糖苷鍵，釋放游離尿嘧啶。

 

產(chǎn)品組分

編號(hào)	組分	產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格
		14001ES60 (100 U)	14001ES76 (500 U)
14001	Uracil DNA Glycosylase (UDG), (1 U/μL)	100 μL	500 μL

 

產(chǎn)品應(yīng)用

1.去除含dU的PCR產(chǎn)物氣溶膠污染。

2.去除單鏈或雙鏈DNA尿嘧啶堿基。

 

酶活定義

以25℃，30 min內(nèi)完全降解1 μg含有尿嘧啶的dsDNA所需酶量定義為1個(gè)活性單位(U)。

 

失活方式

95℃，5-10 min。

 

運(yùn)輸儲(chǔ)存方法

冰袋運(yùn)輸。4℃保存，有效期6個(gè)月。

 

注意事項(xiàng)

1.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

應(yīng)用實(shí)例

1. 按下列組份配制PCR反應(yīng)液：

試劑	體積
10×PCR Buffer (Mg2+ Plus)	5 μL
25 mmol/L MgCl2	3 μL
dUTP	0.6 mmol/L
dCTP / dGTP/ dATP	0.2 mmol/L each
模板DNA	Optional
引物1 (10 μmol/L)	2 μL
引物2 (10 μmol/L)	2 μL
Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	0.5 μL
UDG (1 U/μL)	1 μL
ddH2O	To 50 μL

【注】：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，dUTP終濃度可在0.2-0.6 mmol/L之間調(diào)整?？蛇x擇性摻入0.2 mmol/L dTTP。

2. PCR反應(yīng)：

反應(yīng)溫度	反應(yīng)時(shí)間	循環(huán)數(shù)	目的
25℃	10 min	1	降解含U模板
94℃	2 min	1	UDG酶失活，模板預(yù)變性
95℃	10 sec	30-35	變性
60℃	20 sec		退火
72℃	30 sec/kb		延伸
72℃	5 min	1	終延伸

【注】：25℃反應(yīng)時(shí)間可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要在5-10 min內(nèi)調(diào)整。

 

HB221013