2. 灌膠：

不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠

1) 預(yù)先可將梳子完全放入組合好的凝膠夾中，在梳齒下端 1 cm處作標(biāo)記。用來粗略估計分離膠添加高度；

2) 混合所有試劑來制作分離膠單體溶液。將溶液注入玻璃板之間至標(biāo)記處。注入溶液時須平穩(wěn)以防止其與空氣混合；立即以水或者異丙醇覆蓋溶液表面。注意：如果用水覆蓋須小心緩慢平穩(wěn)加入以防與溶液混合；

3) 放置45 min到1 h使凝膠聚合（或者根據(jù)不同品牌的配膠試劑盒要求，進(jìn)行判斷凝膠情況）?？捎秒p蒸水徹底清洗凝膠表面。不要讓醇類物質(zhì)在膠上超過1小時以防止上部凝膠脫水；

4) 準(zhǔn)備濃縮膠單體溶液。注入濃縮膠溶液前用濾紙使分離膠表面干燥；將溶液注入玻璃板之間直至與短玻璃板平齊；在邊條之間從上部插入所需的梳子，確認(rèn)梳子兩端突起在邊條之間引導(dǎo)，完全插入直至梳子背脊與短玻璃板對齊；

5) 放置30-45 min使?jié)饪s膠聚合（或者根據(jù)不同品牌的配膠試劑盒要求，進(jìn)行判斷凝膠情況）；

6) 輕輕取出梳子并以蒸餾水或緩沖液徹底清洗凝膠表面。以蒸餾水，去離子水清洗用過的灌膠架和制膠底座。

連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠

1) 混合所有試劑來制作凝膠單體溶液，將溶液注入玻璃板之間直至與短玻璃板平齊；

2) 在邊條之間從上部插入所需的梳子，確認(rèn)梳子兩端突起在邊條之間引導(dǎo)。完全插入直至梳子背脊與短玻璃板對齊；

3) 放置45 min到1 h使凝膠聚合（或者根據(jù)不同品牌的配膠試劑盒要求，進(jìn)行判斷凝膠情況）；

4) 輕輕取出梳子并以蒸餾水或緩沖液徹底清洗凝膠表面；

5) 以蒸餾水，去離子水清洗用過的夾膠框和制膠架。

3. 電泳模塊組裝與上樣所需材料：

1) 準(zhǔn)備潔凈干燥的電泳緩沖液槽；電泳芯模塊（1個電泳芯模塊只能用于1或2塊膠，做3或4塊膠需要2個模塊）；電泳緩沖液（1-2塊膠700 mL；3-4塊膠1,000 mL）；

【注】：只運行2塊膠時只需使用電極插頭的電泳芯。運行4塊膠時，電極插頭的電泳芯和蘑菇頭電泳芯均要使用，每個組件2塊膠。

4. 蛋白上樣：

1) 向電泳槽中注入電泳緩沖液，外槽至外玻璃板上沿之下，內(nèi)槽加滿；

2) 樣本可在電泳芯被放入電泳儀之前或之后進(jìn)行；

3) 使用注射器或加樣槍將樣品加入樣品孔中（加樣孔體積可參考附件1）。

【注】：加樣時應(yīng)緩慢使樣品均勻沉降于樣品孔底部。注意不要用針頭或加樣器頭刺破膠孔底部；正極和負(fù)極均需注入緩沖液，建議正負(fù)極緩沖液的液面等高。

5. 在緩沖液槽中放置電泳模塊：

【注】：所需緩沖液體積：2塊膠700 mL；4塊膠1,000 mL；緩沖液槽具有兩個位置可放置兩個模塊：帶插頭電泳芯在后，蘑菇頭電泳芯在前。

1) 首先把緩沖液槽放置于平整桌面上，使正面（具2-Gels 和4-Gels標(biāo)記的那一面）朝前。如果方向正確，槽邊緣的紅色標(biāo)記應(yīng)該在右邊，黑色標(biāo)記在左邊；

2) 如果只運行2塊膠則只需用帶插頭電泳芯，將其放在后部位置上使得紅色（+）極與槽右側(cè)的紅色標(biāo)記相對應(yīng)；

3) 如需做4塊膠，除放入帶插頭電泳芯外，還要將蘑菇頭電泳芯放入前部位置。確認(rèn)兩者的紅色（+）極與槽右側(cè)的紅色標(biāo)記相對應(yīng)。注意，位置和方向的錯誤會使上蓋無法蓋合；

4) 在緩沖液槽中加入緩沖液至標(biāo)記位置。

6. 緩沖液槽裝配：

將上蓋蓋在緩沖液槽上。確認(rèn)顏色標(biāo)記的插頭與插座相對應(yīng)，插頭、插座的匹配可以使定位準(zhǔn)確，上蓋上的障礙物可以防止定位錯誤。注意，緩沖液槽兩側(cè)的尖突出部分應(yīng)該從上蓋的狹縫中穿出，以保證上蓋的正確閉合。此時用拇指持續(xù)用力按壓上蓋，直到壓緊在緩沖液槽上。

7. 電源條件：

1) 將電源插頭認(rèn)準(zhǔn)正負(fù)極插入電泳儀電源插孔內(nèi)；

2) 給迷你垂直電泳槽通電開始電泳。恒壓200 V是SDS-PAGE和多數(shù)native PAGE電泳的推薦條件，可以被用于2塊膠和4 塊膠上，不同應(yīng)用其優(yōu)化的電壓條件會不同。在200 V電壓條件下運行SDS-PAGE 大約需要35 min。