產(chǎn)品簡介

 

phi29 DNA polymerase來源于Bacillus subtilis噬菌體，經(jīng)基因工程改造后具有卓越的鏈置換和持續(xù)合成能力，可合成長達(dá)70 kb的DNA片段。此外其3’→5’核酸外切酶校讀活性較強(qiáng)，推薦體系中引物3’末端修飾以防止降解，常用于質(zhì)粒的體外合成和全基因組合成。

 

產(chǎn)品信息

 

貨號(hào)	14404ES72 / 14404ES80 / 14404ES90
規(guī)格	250 U / 1,000 U /5,000 U
酶活定義	30℃條件下反應(yīng)10 min，能使0.5 pmol的dNTP摻入酸不溶性沉淀所需的酶量
熱失活	65℃，10 min。

 

組分信息

 

組分編號(hào)	組分名稱	14404ES72	14404ES80	14404ES90
14404-A	phi29 DNA Polymerase (10 U/μL）	25 μL	100 μL	500 μL
14404-B	10×phi29 Reaction Buffer	100 μL	400 μL	2×1 mL

 

儲(chǔ)存條件

 

-25~-15℃保存，有效期2年。

 

使用說明

 

以基因組DNA擴(kuò)增為例

1. 反應(yīng)體系配置

組分	用量
10×phi29 Reaction Buffer	2 μL
隨機(jī)引物	總投入量20-75 μM
dNTPs	總投入量2 mM
基因組DNA	5-50 ng
ddH2O	to 19 μL

2. 將上述反應(yīng)體系置于PCR儀中95℃孵育5 min，迅速置于冰浴2 min，使DNA模板變性*。

3. 向上述體系中加入1-2 μL phi29 DNA Polymerase (10 U/μL)，30-42℃孵育3 h**。

4. 65℃，10 min失活phi29 DNA polymerase。

*：基因組、質(zhì)粒DNA等模板預(yù)變性可選。

**：該酶在42℃可達(dá)到最高擴(kuò)增產(chǎn)量。

 

注意事項(xiàng)

 

1.Buffer在融解時(shí)，如果出現(xiàn)少量沉淀屬正?，F(xiàn)象，請顛倒混勻后使用。

2.本產(chǎn)品僅作科研用途。

3.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

 

 

Ver.CN20231204