產(chǎn)品說明書
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已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品簡介
人白細(xì)胞介素-5 (Human IL-5)是由活化T細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，可刺激嗜酸性粒細(xì)胞生長和分化。人IL-5由134個氨基酸殘基組成，含22個氨基酸殘基信號肽，2個糖基化點。人IL-5基因定位于第5號染色體，與IL-3、IL-4、GM-CSF等造血因子的基因密切連鎖。人和鼠IL-5在氨基酸水平上有70%的同源性，生物學(xué)作用有交叉反應(yīng)。
翌圣Human IL-5 ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，用于定量測定血清、血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清中的人白細(xì)胞介素-5(Human IL-5)。特異性抗人白細(xì)胞介素-5抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本，經(jīng)過孵育，樣本中存在的人白細(xì)胞介素-5與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入檢測抗體（生物素標(biāo)記）孵育結(jié)合，經(jīng)洗滌，再加入酶結(jié)合物(HRP標(biāo)記鏈霉親和素)孵育結(jié)合。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中人白細(xì)胞介素-5的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng)，在450 nm 波長(參考波長570 - 630 nm)測定吸光度值。
產(chǎn)品信息
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貨號 |
97034ES48 / 97034ES96 |
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規(guī)格 |
48 T / 96 T |
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檢測范圍 |
3.5-225 pg/mL |
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檢測方法 |
雙抗夾心法 |
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檢測物種 |
人 |
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檢測時長 |
4小時40分鐘 |
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靈敏度 |
0.16 pg/mL |
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稀釋線性 |
101.0 - 123.0% |
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回收率 |
70.3 - 107.4% |
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板內(nèi)差 |
3.9% |
|
板間差 |
3.8% |
實驗數(shù)據(jù)
1.標(biāo)曲數(shù)據(jù)
數(shù)據(jù)擬合繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，生成的標(biāo)曲用于實驗數(shù)據(jù)分析。
標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
2.靈敏度檢測
人白細(xì)胞介素-5的最低檢測限為0.16 pg/mL，通過使用重復(fù)檢測20次零孔OD值的均值與標(biāo)準(zhǔn)差計算得出。
3.精密度檢測
酶標(biāo)板內(nèi)精密度
3個已知濃度的樣本酶標(biāo)板內(nèi)重復(fù)測定20次，評估酶標(biāo)板內(nèi)的精密度。
酶標(biāo)板間精密度
3個已知濃度的樣本酶標(biāo)板間重復(fù)檢測36次，評估酶標(biāo)板間的精密度。
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項目 |
板內(nèi)精密度 |
板間精密度 |
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樣本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
|
20 |
20 |
20 |
36 |
36 |
36 |
|
|
平均值 |
118.4 |
31.8 |
8.0 |
117.3 |
31.4 |
7.8 |
|
標(biāo)準(zhǔn)差 |
4.65 |
0.86 |
0.39 |
4.13 |
0.90 |
0.40 |
|
變異系數(shù)（%） |
4.0 |
2.8 |
5.0 |
3.5 |
2.9 |
5.1 |
4.回收率檢測
通過不同水平的人白細(xì)胞介素-5添加于樣本中來測定回收率，其回收率如下:
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樣本類型 |
平均回收率(%) |
范圍（%） |
|
血清 |
97.9 |
87.5-107.2 |
|
血漿 |
83.7 |
70.3-94.8 |
|
細(xì)胞培養(yǎng)上清 |
97.4 |
84.6-107.4 |
5.稀釋線性檢測
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血清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
104.9 |
103.1-108.7 |
|
1:04 |
109.8 |
106.8-114.0 |
|
1:08 |
107.8 |
102.6-111.2 |
|
1:16 |
105.3 |
103.6-108.5 |
|
血漿稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
105.6 |
101.6-107.7 |
|
1:04 |
113.5 |
108.0-120.7 |
|
1:08 |
112.7 |
106.5-118.6 |
|
1:16 |
114.0 |
105.0-123.0 |
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細(xì)胞培養(yǎng)上清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
107.8 |
106.4-110.4 |
|
1:04 |
108.2 |
101.0-114.2 |
|
1:08 |
108.9 |
105.9-114.0 |
|
1:16 |
108.0 |
102.6-113.8 |
6.樣本值
應(yīng)用本試劑盒，檢測若干健康志愿者的樣本，志愿者的用藥史不詳。
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樣本類型 |
樣本數(shù)目 |
平均值（pg/mL） |
樣本值（pg/mL） |
|
血清 |
10 |
1.18 |
n.d.-7.60 |
|
血漿 |
10 |
7.05 |
n.d.-48.42 |
|
細(xì)胞培養(yǎng)上清 |
10 |
n.d. |
n.d. |
n.d. 指樣本濃度值低于檢測范圍內(nèi)得3.5 pg/mL
7.測定特異性
本試劑盒識別天然和重組人血清白蛋白。下述因子進(jìn)行了特異性的評估，沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)和干擾影響。
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Recombinant human: |
Natural proteins: |
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IL-3 |
mouse IL-5 |
equine IL-5 |
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IL-5 Rα |
rat IL-5 |
feline IL-5 |
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bovine IL-5 |
porcine IL-5 |
檢測簡圖
疑問解答
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問題 |
造成原因 |
解決方法 |
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標(biāo)曲不好 |
移液量不準(zhǔn)確 |
檢查移液器，按時校準(zhǔn)，仔細(xì)操作，充分混勻時蓋緊管口并盡量避免泡沫。 |
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稀釋方法不恰當(dāng) |
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顯色值偏低 |
孵育時間太短 |
給予足夠的孵育時間，樣本和溶解的標(biāo)準(zhǔn)品隔夜后更換。 |
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移液量不足或稀釋不當(dāng) |
校準(zhǔn)移液器和規(guī)范操作 |
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CV偏高 |
酶標(biāo)板清洗不當(dāng) |
使用正確的洗滌工序；如果使用洗板機(jī)，檢查所有的端口是否堵塞。 |
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受污染的洗液 |
準(zhǔn)備新鮮洗液 |
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靈敏度較低 |
試劑盒儲存不當(dāng) |
按照產(chǎn)品組分表進(jìn)行保存。 |
Ver. CN20231225
