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白細(xì)胞介素34(IL-34;也稱為未表征的蛋白C16orf77)以由39kDa單體組成的同源二聚體形式分泌。它不屬于已知的細(xì)胞因子家族。人IL-34合成為242個(gè)氨基酸(aa)的前體,其中包含20 aa信號(hào)序列和222 aa成熟鏈。成熟鏈包含一個(gè)潛在的N-連接糖基化位點(diǎn)。人IL-34在氨基酸水平上與小鼠IL-34相同71%。
IL-34在各種組織中表達(dá),包括心臟、大腦、肝臟、腎臟、脾臟、胸腺、睪丸、卵巢、小腸、前列腺和結(jié)腸,在脾臟中含量最高。IL-34的受體是集落刺激因子1受體(CSF-1R)。IL-34刺激單核細(xì)胞增殖。在功能研究中,IL-34與CSF-1(CSF-1R的另一個(gè)配體)一樣,刺激人單核細(xì)胞中細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶-1和-2(ERK1 / 2)的磷酸化。此外,IL-34促進(jìn)了人骨髓培養(yǎng)物中巨噬細(xì)胞祖細(xì)胞集落形成單位巨噬細(xì)胞(CFU-M)的形成。
翌圣Human IL-34 ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒,用于定量測(cè)定血清、血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清中的人白介素34(Human IL-34)。特異性抗人白介素34抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本,經(jīng)過孵育,樣本中存在的人白介素34與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后,加入檢測(cè)抗體(生物素標(biāo)記)孵育結(jié)合,經(jīng)洗滌,再加入酶結(jié)合物(HRP標(biāo)記鏈霉親和素)孵育結(jié)合。洗滌后,加入顯色底物 TMB,避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中人白介素34的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng),在450 nm 主波長(zhǎng),630nm次波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值。
產(chǎn)品信息
貨號(hào) |
97033ES48 / 97033ES96 |
規(guī)格 |
48 T / 96 T |
檢測(cè)范圍 |
31.25-2000 pg/mL |
檢測(cè)方法 |
雙抗夾心法 |
檢測(cè)物種 |
人 |
檢測(cè)時(shí)長(zhǎng) |
4小時(shí)55分鐘 |
靈敏度 |
2.893 pg/mL |
稀釋線性 |
73.7 -125.1 % |
回收率 |
73.4 - 126.8 % |
板內(nèi)差 |
6.0 % |
板間差 |
3.2 % |
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
人白介素34的最低檢測(cè)限為2.893 pg/mL,通過使用重復(fù)檢測(cè)20次零孔OD值的均值與標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算得出。
酶標(biāo)板內(nèi)精密度
3個(gè)已知濃度的樣本酶標(biāo)板內(nèi)重復(fù)測(cè)定20次,評(píng)估酶標(biāo)板內(nèi)的精密度。
酶標(biāo)板間精密度
3個(gè)已知濃度的樣本酶標(biāo)板間重復(fù)檢測(cè)36次,評(píng)估酶標(biāo)板間的精密度。
項(xiàng)目 |
板內(nèi)精密度 |
板間精密度 |
||||
樣本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
20 |
20 |
20 |
36 |
36 |
36 |
|
平均值 |
1617.9 |
455.3 |
108.8 |
1696.5 |
473.9 |
109.4 |
標(biāo)準(zhǔn)差 |
64.3 |
25.5 |
9.1 |
68.3 |
20.6 |
1.3 |
變異系數(shù)(%) |
4.0 |
5.6 |
8.4 |
4.0 |
4.4 |
1.2 |
通過不同水平的人白介素34添加于樣本中來測(cè)定回收率,其回收率如下:
樣本類型 |
平均回收率(%) |
范圍(%) |
血清 |
95.3 |
73.4-118.9 |
血漿 |
101.3 |
84.7-126.8 |
細(xì)胞培養(yǎng)上清 |
106.0 |
82.3-122.6 |
血清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍(%) |
1:02 |
100.1 |
93.6-103.2 |
1:04 |
105.5 |
94.8-114.5 |
1:08 |
108.2 |
101.9-121.6 |
1:16 |
105.7 |
94.1-121.9 |
血漿稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍(%) |
1:02 |
95.6 |
89.2-103.4 |
1:04 |
95.8 |
79.1-125.1 |
1:08 |
97.6 |
83.1-123.3 |
1:16 |
94.1 |
79.2-121.5 |
細(xì)胞培養(yǎng)上清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍(%) |
1:02 |
88.0 |
82.0-93.5 |
1:04 |
87.1 |
81.7-90.2 |
1:08 |
88.4 |
73.7-107.7 |
1:16 |
90.0 |
81.4-94.9 |
應(yīng)用本試劑盒,檢測(cè)若干健康志愿者的樣本,志愿者的用藥史不詳。
樣本類型 |
樣本數(shù)目 |
平均值(pg/mL) |
樣本值(pg/mL) |
血清 |
10 |
16 |
n.d.-61 |
EDTA血漿 |
4 |
n.d. |
n.d. |
肝素血漿 |
2 |
n.d. |
n.d. |
枸櫞酸鈉血漿 |
4 |
24.5 |
n.d.-68 |
細(xì)胞培養(yǎng)上清 |
10 |
n.d. |
n.d. |
n.d. 指樣本濃度值低于檢測(cè)范圍內(nèi)的31.25 pg/mL。
本試劑盒識(shí)別天然和重組人白介素34。下述因子進(jìn)行了特異性的評(píng)估,沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)和干擾影響。
Recombinant human: |
Recombinant mouse: |
M-CSF |
IL-34 |
|
M-CSF |
|
M-CSF R |
問題 |
造成原因 |
解決方法 |
標(biāo)曲不好 |
移液量不準(zhǔn)確 |
檢查移液器,按時(shí)校準(zhǔn),仔細(xì)操作,充分混勻時(shí)蓋緊管口并盡量避免泡沫。 |
稀釋方法不恰當(dāng) |
||
顯色值偏低 |
孵育時(shí)間太短 |
給予足夠的孵育時(shí)間,樣本和溶解的標(biāo)準(zhǔn)品隔夜后更換。 |