產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
Hieff NGS® DNA Fragmentation Reagent是針對二代測序高通量測序平臺設(shè)計的新一代酶切法建庫試劑。本品采用高質(zhì)量的片段化酶，擺脫了繁瑣的超聲過程，同時簡化了操作流程，將片段化模塊與末端修復(fù)/加A模塊合二為一，極大的降低了建庫的時間和成本?？蓱?yīng)用于50 ng-1 μg常規(guī)動植物基因組、微生物基因組等樣本，在單管內(nèi)實現(xiàn)DNA的片段化、末端修復(fù)和A尾添加反應(yīng)。反應(yīng)產(chǎn)物無需純化，即可使用Hieff NGS® Rapid DNA Ligation Module for Kit（Cat#13580）進(jìn)行文庫構(gòu)建中接頭連接反應(yīng)。
- 適用50 ng-1 μg的基因組DNA
- 高質(zhì)量片段化酶，可隨機(jī)切割雙鏈DNA，酶切片段無偏好性
- 片段化、末端修復(fù)/加A一步完成
- 嚴(yán)格的批次性能與穩(wěn)定性質(zhì)控
產(chǎn)品組分
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組分編號 |
組分名稱 |
24 T |
96 T |
10000 T |
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13507-A |
Smearase® Buffer |
240 μL |
960 μL |
100 mL |
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13507-B |
Smearase® Enzyme |
120 μL |
480 μL |
50 mL |
運(yùn)輸與保存方法
干冰運(yùn)輸。-20℃保存，有效期18個月。
注意事項
1. 本試劑盒兼容范圍為50 ng – 1 μg Input DNA。應(yīng)盡可能使用A260/A280 = 1.8-2.0的高質(zhì)量Input DNA。
2. 若Input DNA中引入高濃度金屬離子螯合劑或其他鹽，可能會影響后續(xù)實驗，建議將DNA稀釋在TE（10 mM Tris-HCl ,1 mM EDTA，pH 8.0）中進(jìn)行片段化。
3. 對于常規(guī)的高質(zhì)量基因組DNA，酶切時間參考表1。本試劑盒片段化偏好低，耐受各種GC含量的模板。
表1 常規(guī)基因組DNA片段化時間推薦表
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插入片段主峰大小 |
片段化時間 |
優(yōu)化范圍 |
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900 bp |
8 min |
8-9 min |
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750 bp |
10 min |
9-11 min |
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300 bp |
15 min |
11-16 min |
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250 bp |
20 min |
16-22 min |
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200 bp |
25 min |
22-30 min |
【注】：以上為推薦時間，需客戶在自己的實驗體系中進(jìn)行微調(diào)，以達(dá)到最佳效果。
4. 參照片段化步驟推薦條件可將DNA酶切為所需大小，為保證優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定的片段化效果，片段化過程請于冰上操作。
5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
DNA片段化/末端修復(fù)/dA尾添加（DNA Fragment/End Preparation/dA-Tailing）
該步驟將基因組DNA片段化，同時進(jìn)行末端修復(fù)及dA尾添加。
1. 將表2中試劑解凍后，顛倒混勻，置于冰上備用。
2. 于冰上配制表2反應(yīng)體系。
表2 DNA片段化/末端修復(fù)/dA尾添加 PCR反應(yīng)體系
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名稱 |
體積（μL） |
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Input DNA |
x |
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Smearase® Buffer |
10 |
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Smearase® Enzyme |
5 |
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1×TE |
Up to 60 μL |
3. 使用移液器輕輕吹打或振蕩混勻，并短暫離心將反應(yīng)液離心至管底。
4. 將上述PCR管置于PCR儀，設(shè)置表3所示反應(yīng)程序，進(jìn)行DNA片段化，末端修復(fù)及dA尾添加反應(yīng)。
表3 DNA片段化/末端修復(fù)/dA尾添加 PCR反應(yīng)程序
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溫度 |
時間 |
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熱蓋105°C |
On |
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4 °C |
1 min* |
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30 °C |
8-25 min** |
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65 °C |
20 min |
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4 °C |
Hold |
【注】：*DNA片段化過程為有效控制片段化效果，避免過度酶切，反應(yīng)程序可預(yù)先設(shè)置4℃，待模塊溫度降至4℃時，將PCR管放入PCR儀即可。**對于完整的基因組DNA，酶切時間參考表1。
5. 產(chǎn)物如需純化，可使用Hieff NGS® DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效產(chǎn)品。也可以直接駁接Hieff NGS® Rapid DNA Ligation Module for Kit（Cat#13580）試劑盒，進(jìn)行接頭連接。詳細(xì)說明請見后者的說明書。
參考實例
使用本試劑盒對200 ng Human gDNA (NA12878) 樣本進(jìn)行酶切檢測，片段化結(jié)果見下圖。
HB221228
