人生長分化因子-15(GDF-15)又稱巨噬細胞抑制性細胞因子-1(Mic-1),是轉(zhuǎn)化生長因子β (TGF-β) 超家族的趨異成員。GDF-15的前體蛋白由308個氨基酸殘基組成,經(jīng)過酶切修飾后形成一個含有7個半胱氨酸殘基的C端結構域。在人體中,GDF-15在胎盤中高表達,腎臟、胰腺和前列腺中表達水平較低。白細胞介素-1和轉(zhuǎn)化生長因子-β等細胞因子可迅速誘導其表達。GDF-15具有多種生物學功能。GDF-15在腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移中也起著重要的作用,如結直腸癌、乳腺癌和前列腺癌,GDF-15的表達均有顯著增加。在腫瘤進展期間,GDF-15在細胞凋亡、分化、血管生成和轉(zhuǎn)移均有影響,并在成癌癥期間體重減輕方面有所影響。
翌圣Human GDF-15 ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒,用于定量測定血清、血漿中的人生長分化因子15(Human GDF-15)。特異性抗人生長分化因子15抗體預包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本,經(jīng)過孵育,樣本中存在的人生長分化因子15與固相抗體結合。洗滌去除未結合的物質(zhì)后,加入檢測抗體孵育結合,經(jīng)洗滌,再加入酶結合物(Streptavidin-HRP)孵育結合。洗滌后,加入顯色底物 TMB,避光顯色。顏色反應的深淺與樣本中人生長分化因子15的濃度成正比。加入終止液終止反應,在450 nm 波長(參考波長570 - 630 nm)測定吸光度值。
產(chǎn)品信息
貨號 |
97021ES48 / 97021ES96 |
規(guī)格 |
48 T / 96 T |
檢測范圍 |
7.81-500 pg/mL |
檢測方法 |
雙抗夾心法 |
檢測物種 |
人 |
檢測時長 |
5小時 |
靈敏度 |
0.205 pg/mL |
稀釋線性 |
85.7 - 105.0 % |
回收率 |
80.9 - 98.9% |
板內(nèi)差 |
4.3% |
板間差 |
4.4% |
實驗數(shù)據(jù)
數(shù)據(jù)擬合繪制標準曲線,生成的標曲用于實驗數(shù)據(jù)分析。
標準曲線圖
人生長分化因子15的最低檢測限為0.205 pg/mL,通過使用重復檢測20次零孔OD值的均值與標準差計算得出。
酶標板內(nèi)精密度
3個已知濃度的樣本酶標板內(nèi)重復測定20次,評估酶標板內(nèi)的精密度。
酶標板間精密度
3個已知濃度的樣本酶標板間重復檢測36次,評估酶標板間的精密度。
項目 |
板內(nèi)精密度 |
板間精密度 |
||||
樣本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
20 |
20 |
20 |
36 |
36 |
36 |
|
平均值 |
15.0 |
59.4 |
243.0 |
14.7 |
59.7 |
246.2 |
標準差 |
0.72 |
1.86 |
12.18 |
0.80 |
2.01 |
10.84 |
變異系數(shù)(%) |
4.8 |
3.1 |
5.0 |
5.4 |
3.4 |
4.4 |
通過不同水平的人生長分化因子15添加于樣本中來測定回收率,其回收率如下:
樣本類型 |
平均回收率(%) |
范圍(%) |
血清樣本 |
92.1 |
80.9-98.9 |
血漿樣本 |
91.4 |
81.5-98.6 |
血清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍(%) |
1:02 |
101.5 |
99.8-103.8 |
1:04 |
101.4 |
99.9-102.4 |
1:08 |
93.3 |
90.3-95.3 |
1:16 |
88.7 |
87.2-90.6 |
血漿稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍(%) |
1:02 |
100.2 |
96.5-105.0 |
1:04 |
97.0 |
94.0-100.0 |
1:08 |
91.1 |
86.7-95.5 |
1:16 |
88.4 |
85.7-90.5 |
應用本試劑盒,檢測若干健康志愿者的樣本,志愿者的用藥史不詳。
樣本類型 |
樣本數(shù)目 |
平均值(pg/mL) |
樣本值(pg/mL) |
血清樣本 |
10 |
959.5 |
260-3114.6 |
肝素血漿 |
10 |
470.7 |
145.1-1275.8 |
EDTA血漿 |
10 |
1550.7 |
197.8-6836.5 |
枸櫞酸鈉血漿 |
10 |
1948.5 |
247.7-9605.4 |
本試劑盒識別天然和重組人生長分化因子15。下述因子進行了特異性的評估,沒有觀察到明顯的交叉反應和干擾影響。
Recombinant human: |
Recombinant mouse: |
GDF-5 |
GDF-5 |
GDF-7 |
GDF-6 |
GDF-9 |
GDF-7 |
GDF-11 |
GDF-8 |
TGF-β RII/Fc |
|
TFG-β2 |
|
檢測簡圖
疑問解答
問題 |
造成原因 |
解決方法 |
標曲不好 |
移液量不準確 |
檢查移液器,按時校準,仔細操作,充分混勻時蓋緊管口并盡量避免泡沫。 |
稀釋方法不恰當 |
||
顯色值偏低 |
孵育時間太短 |
給予足夠的孵育時間,樣本和溶解的標準品隔夜后更換。 |
移液量不足或稀釋不當 |
校準移液器和規(guī)范操作 |
|
CV偏高 |
酶標板清洗不當 |
使用正確的洗滌工序;如果使用洗板機,檢查所有的端口是否堵塞。 |
受污染的洗液 |
準備新鮮洗液 |
|
靈敏度較低 |
試劑盒儲存不當 |
按照產(chǎn)品組分表進行保存。 |