瘦素是一種由脂肪細胞分泌產(chǎn)生的蛋白質(zhì)類激素，它通過抑制饑餓來幫助調(diào)節(jié)能量平衡，被稱為“饑餓激素”的胃饑餓素可拮抗瘦素發(fā)揮作用。瘦素分子量為16 kDa,是由146個氨基酸殘基組成的非糖基化蛋白，人瘦素與小鼠和大鼠的同源性分別為87%和84%，且人瘦素在小鼠和大鼠中可發(fā)揮生物學活性。瘦素主要產(chǎn)生于白色脂肪組織的脂肪細胞，也由褐色脂肪組織、胎盤、卵巢、骨骼肌、胃、乳腺上皮細胞、骨髓、胃主細胞和P/D1細胞產(chǎn)生。瘦素的表達情況受體內(nèi)激素、細胞因子及營養(yǎng)狀態(tài)影響,如參與正能量平衡的胰島素和糖皮質(zhì)激素可促進瘦素表達，而參與負能量平衡的兒茶酚胺則抑制瘦素的表達。在肥胖人群中，瘦素的敏感性降低，導(dǎo)致在能量儲備高的情況下無法察覺飽腹感。

翌圣Human Leptin ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，用于定量測定血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清中的人瘦素(Human Leptin)。特異性抗人瘦素抗體預(yù)包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本，經(jīng)過孵育，樣本中存在的人瘦素與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入檢測抗體孵育結(jié)合，經(jīng)洗滌，再加入酶結(jié)合物(Streptavidin-HRP)孵育結(jié)合。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中人瘦素的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng)，在450 nm 波長(參考波長570 - 630 nm)測定吸光度值。

 

產(chǎn)品信息

貨號	97036ES48 / 97036ES96
規(guī)格	48 T / 96 T
檢測范圍	15.63-1000 pg/mL
檢測方法	雙抗夾心法
檢測物種	人
檢測時長	5小時
靈敏度	0.586 pg/mL
稀釋線性	81.9 - 96.1 %
回收率	73.9 - 106.9%
板內(nèi)差	2.9%
板間差	3.6%

 

實驗數(shù)據(jù)

1. 標曲數(shù)據(jù)

數(shù)據(jù)擬合繪制標準曲線，生成的標曲用于實驗數(shù)據(jù)分析。

標準曲線圖

 

2. 靈敏度檢測

人瘦素的最低檢測限為0.586 pg/mL，通過使用重復(fù)檢測20次零孔OD值的均值與標準差計算得出。

3. 精密度檢測

酶標板內(nèi)精密度

3個已知濃度的樣本酶標板內(nèi)重復(fù)測定20次，評估酶標板內(nèi)的精密度。

酶標板間精密度

3個已知濃度的樣本酶標板間重復(fù)檢測30次，評估酶標板間的精密度。

項目	板內(nèi)精密度			板間精密度
樣本	1	2	3	1	2	3
	20	20	20	30	30	30
平均值	14.8	98.1	521.1	14.9	98.5	522.4
標準差	0.8	1.4	8.5	1.1	1.9	8.7
變異系數(shù)（%）	5.7	1.5	1.6	7.1	1.9	1.7

4. 回收率檢測

  通過不同水平的人瘦素添加于樣本中來測定回收率，其回收率如下:

樣本類型	平均回收率(%)	范圍（%）
血清	91.7	77.5-106.9
血漿	89.0	75.8-105.3
細胞培養(yǎng)上清	87.9	73.9-101.5

5. 稀釋線性檢測

血清稀釋比例	平均期望值(%)	范圍（%）
1:02	91.1	89.6-92.3
1:04	86.9	85.6-88.6
1:08	86.9	85.8-88.1
1:16	91.7	90.7-93.7

 

血漿稀釋比例	平均期望值(%)	范圍（%）
1:02	91.2	90.6-92.1
1:04	86.2	82.7-88.2
1:08	84.3	82.2-85.5
1:16	91.7	90.7-93.4

 

細胞培養(yǎng)上清稀釋比例	平均期望值(%)	范圍（%）
1:02	89.2	86.8-93.8
1:04	85.4	83.1-88.5
1:08	86.7	81.9-92.3
1:16	94.6	93.2-96.1

6. 樣本

應(yīng)用本試劑盒，檢測若干健康志愿者的樣本，志愿者的用藥史不詳。

樣本類型	樣本數(shù)目	平均值（pg/mL）	樣本值（pg/mL）
血清	10	7560.0	645.8-19580.0
肝素血漿	10	9461.5	21.9-20524.6
EDTA血漿	10	11340.4	4056.9-32826.0
枸櫞酸鈉血漿	10	5240.5	1325.3-15307.8
細胞培養(yǎng)上清	10	n.d.	n.d.

n.d. 指樣本濃度值低于檢測范圍內(nèi)的15.63 pg/mL。

7. 測定特異性

本試劑盒識別天然和重組人瘦素。下述因子進行了特異性的評估，沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)和干擾影響。

Recombinant human:		Recombinant mouse:	Recombinant rat:
IFN-γ	IL-17A	IFN-γ	IFN-γ
IL-1β	IL-18	IL-1β	IL-1β
IL-2	IL-21	IL-2	IL-4
IL-4	IL-22	IL-4	IL-6
IL-5	IL-23	IL-6	IL-10
IL-6	MCP-1	IL-10	TNF-α
IL-8	TGF-β1	IL-17A
IL-10	TNF-α	TNF-α
IL-12	VEGF