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蛋白電泳經(jīng)常使用聚丙烯酰胺凝膠(PAGE凝膠)來(lái)實(shí)現(xiàn)蛋白分離,此類凝膠一般由濃縮膠和分離膠兩部分組成,前者起到將蛋白樣品進(jìn)行濃縮的作用,后者則是根據(jù)凝膠所使用的丙烯酰胺單體和N,N-亞甲基雙丙烯酰胺(甲叉丙烯酰胺)交聯(lián)劑的濃度不同從而分離不同大小范圍的蛋白質(zhì)。
本試劑盒適用于Tris-甘氨酸電泳體系,其中包括快速制備PAGE凝膠所需的各種試劑,用戶只需自備制膠設(shè)備即可配膠,大大簡(jiǎn)化了制膠過(guò)程,
此外,本品還具有以下特點(diǎn):
1)制膠速度快——最少僅需2 min即可灌制多塊凝膠,無(wú)需計(jì)算所需溶液量,無(wú)需稀釋;
2)彩色濃縮膠——濃縮膠呈彩色,為點(diǎn)樣提供最大便利,所含顏色配方不影響電泳、染色及轉(zhuǎn)膜等后續(xù)應(yīng)用;
3)安全無(wú)異味——無(wú)需使用TEMED,避免接觸過(guò)硫酸銨粉末,遠(yuǎn)離有毒試劑;
4)穩(wěn)定性高——試劑盒配套提供的硫酸銨催化劑溶液屬改良型APS,其穩(wěn)定性和催化效能都得到大大提升。
5)一步法灌膠——可無(wú)需封閉分離膠,直接添加濃縮膠(請(qǐng)熟讀配膠步驟)。
本試劑盒所配制凝膠可用于變性PAGE凝膠電泳,也可用于非變性PAGE凝膠電泳。該規(guī)格可配制不同厚度的凝膠,配制數(shù)量分別為:0.75 mm厚度膠(約125塊)、1.00mm厚度膠(約90塊)、1.50mm厚度膠(約60塊)。
翌圣為您提供Western Blot實(shí)驗(yàn)整體解決方案,相關(guān)產(chǎn)品選購(gòu)請(qǐng)參考:WB實(shí)驗(yàn)系列產(chǎn)品-選購(gòu)指南
【試劑盒操作指南視頻】
產(chǎn)品信息
類別 |
編號(hào) |
組分名稱 |
20326ES62(125 mini gels) |
保存方式 |
Part Ⅰ |
20326-A |
12.5%-分離膠緩沖液 |
250 mL |
2~8℃ |
20326-B |
12.5%-分離膠溶液 |
250 mL |
2~8℃ |
|
20326-C |
12.5%-彩色濃縮膠緩沖液 |
80 mL |
2~8℃ |
|
20326-D |
12.5%-濃縮膠溶液 |
80 mL |
2~8℃ |
|
20326-E |
制膠杯 |
3個(gè) |
2~8℃ |
|
Part Ⅱ |
20326-F |
改良型過(guò)硫酸銨溶液 |
8 mL |
-25~-15℃ |
儲(chǔ)存條件
2~8℃保存。其中F組分改良型過(guò)硫酸銨溶液如果長(zhǎng)時(shí)間不用,需保存于-25~-15℃。有效期1年。
使用說(shuō)明:建議配膠時(shí)不要一次性配置太多塊膠,避免來(lái)不及添加上層液(推薦最多2-3塊)
1 根據(jù)目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度【參考附表1】
2 制膠流程(以一塊0.75/ 1.0/ 1.5 mm的膠為例)
1)取等體積分離膠緩沖液和分離膠溶液混勻,即取兩種溶液各2.0/ 2.7/ 4.0 mL。
2)往步驟1中的混合溶液中加入40/ 55/ 80 μL的改良型過(guò)硫酸銨溶液(凝固太快可減半過(guò)硫酸銨使用量),充分混勻。
3)將步驟2中的溶液注入制膠玻璃板中。注意加入分離膠后要在2 min內(nèi)將濃縮膠注入凝膠模具內(nèi),且在灌注濃縮膠時(shí)要緩慢,防止?jié)饪s膠與分離膠混合在一起。如果個(gè)人覺(jué)得配置困難,也可改編為自行用乙醇封閉之后再進(jìn)行配置濃縮膠。
4)濃縮膠的配置:取等體積濃縮膠緩沖液和濃縮膠溶液混勻,即取兩種溶液各0.5/ 0.75/ 1.0 mL,然后加入10/ 15/ 20 μL的改良型過(guò)硫酸銨溶液,充分混勻。
5)注入制膠玻璃板中,插入梳齒(插膠梳時(shí)切勿用力過(guò)猛,輕輕插入)。
6)待15 min濃縮膠凝固后,拔去梳齒即可用于電泳。注:請(qǐng)盡量使用新鮮配置的電泳緩沖液。
注意事項(xiàng)
1. 建議電泳時(shí)電壓在100-120V之間,如需要加快電泳速度,可增加至150V。
2. 灌膠前,務(wù)必將凝膠溶液及緩沖液平衡到室溫(如室溫放置幾分鐘),可有效避免凝膠中氣泡的形成。
3. 過(guò)硫酸銨溶液(改良型)的使用量?jī)H作參考,實(shí)際用量可根據(jù)個(gè)人實(shí)驗(yàn)習(xí)慣和經(jīng)驗(yàn)增加或減少。加入較多量的過(guò)硫酸銨可加快凝膠速度,反之亦然。PAGE凝膠的凝聚速度與溫度和過(guò)硫酸銨的用量密切相關(guān)。
4. 本產(chǎn)品已加入適量TEMED的替代品,如需進(jìn)一步加快凝膠速度,臨配膠前可按需補(bǔ)充適量TEMED。
5. 膠的凝固與溫度有顯著的正相關(guān)性。同等條件下,溫度越高,凝固速度越快。
6. 彩色濃縮膠在儲(chǔ)存過(guò)程中可能會(huì)產(chǎn)生少量沉淀,屬正常現(xiàn)象,請(qǐng)放心使用。使用前請(qǐng)輕柔混勻。
7. 改良型過(guò)硫酸銨溶液保存于-25~-15℃。為方便吸取使用,建議分裝保存,已開蓋使用中的過(guò)硫酸銨溶液可置于2~8℃保存。
8. 本產(chǎn)品僅作科研用途!
9. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
附表1. 不同濃度SDS-PAGE分離膠參考分離范圍
SDS-PAGE分離膠濃度 |
最佳分離范圍(kDa) |
8%凝膠 |
30-200 |
10%凝膠 |
20-80 |
12.5%凝膠 |
15-60 |
15%凝膠 |
10-45 |
Ver.CN20230620