MMP-9(又稱明膠酶B，92 kDa IV型膠原酶，92 kDa明膠酶，V型膠原酶) 是一種糖化前酶。酶的活化涉及到脫N端PRO區(qū)的蛋白水解，產(chǎn)生82 kDa的活性酶?；钚匀薓MP-9與小鼠和大鼠MMP-9的氨基酸序列同源性分別為72%和74%。除鋅結(jié)合位點外，催化結(jié)構域還包含三個連續(xù)的纖維連接蛋白II型同源性單元，負責結(jié)合明膠。一個富含脯氨酸的鉸鏈區(qū)將催化結(jié)構域連接到C-端血紅素樣結(jié)構域。用4-氨基苯基乙酸汞(APMA) 體外處理前酶，不僅產(chǎn)生活性酶，而且產(chǎn)生C末端截短形式，其活性與活性形式相當。MMP-9降解ECM中對變性膠原(明膠)具有高比活性的成分。它能切割III型、IV型、V型和XI 型的天然膠原，以及彈性蛋白、尼達根-1和維托菌素。MMP-9還能切割多種趨化因子和生長因子(如IL-1β、 CXCL 8/IL-8、CXCL 7、CXCL 4、CXCL 1、潛伏型轉(zhuǎn)化生長因子-β、膜結(jié)合腫瘤壞死因子-α、血管內(nèi)皮生長因子、堿性成纖維細胞生長因子)、淀粉樣α肽、P物質(zhì)和髓鞘堿性蛋白。這種作用可以增加或降低可溶性因子的生物活性，也可以使它們脫離與ECM的聯(lián)系。MMP-9還可通過多種跨膜蛋白觸發(fā)信號傳遞，或通過誘導其從細胞表面脫落(如CD44、E-鈣粘附素、整合素、ICAM-1和IL-2 Rα)而抑制信號傳遞。

翌圣Human MMP-9 ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，用于定量測定血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清中的人基質(zhì)金屬蛋白酶9(Human MMP-9)。特異性抗人基質(zhì)金屬蛋白酶9抗體預包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本，經(jīng)過孵育，樣本中存在的人基質(zhì)金屬蛋白酶9與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入檢測抗體孵育結(jié)合，經(jīng)洗滌，再加入酶結(jié)合物(Streptavidin-HRP)孵育結(jié)合。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應的深淺與樣本中人基質(zhì)金屬蛋白酶9的濃度成正比。加入終止液終止反應，在450 nm 波長(參考波長570 - 630 nm)測定吸光度值。

 

產(chǎn)品信息

貨號	97037ES48 / 97037ES96
規(guī)格	48 T / 96 T
檢測范圍	31.25-2000 pg/mL
檢測方法	雙抗夾心法
檢測物種	人
檢測時長	5小時
靈敏度	7.44 pg/mL
稀釋線性	76.7 -105.9 %
回收率	76.1 - 119.2 %
板內(nèi)差	4.6 %
板間差	5.1 %

 

實驗數(shù)據(jù)

1. 標曲數(shù)據(jù)

2.靈敏度檢測

人基質(zhì)金屬蛋白酶9的最低檢測限為7.44 pg/mL，通過使用重復檢測20次零孔OD值的均值與標準差計算得出。

3.精密度檢測

酶標板內(nèi)精密度

3個已知濃度的樣本酶標板內(nèi)重復測定20次，評估酶標板內(nèi)的精密度。

酶標板間精密度

3個已知濃度的樣本酶標板間重復檢測36次，評估酶標板間的精密度。

項目	板內(nèi)精密度			板間精密度
樣本	1	2	3	1	2	3
	20	20	20	36	36	36
平均值	61.3	234.7	966.3	59.9	235.9	979.6
標準差	4.09	6.91	39.87	5.06	7.71	35.61
變異系數(shù)（%）	6.7	2.9	4.1	8.4	3.3	3.6

4.回收率檢測

  通過不同水平的人基質(zhì)金屬蛋白酶9添加于樣本中來測定回收率，其回收率如下:

樣本類型	平均回收率(%)	范圍（%）
血清	101.8	90.9-109.3
血漿	97.2	85.0-105.0
細胞培養(yǎng)上清	94.1	76.1-119.2

5.稀釋線性檢測

血清稀釋比例	平均期望值(%)	范圍（%）
1:02	99.7	96.3-105.9
1:04	96.1	93.1-102.0
1:08	92.7	85.1-98.8
1:16	90.5	85.7-93.5

 

血漿稀釋比例	平均期望值(%)	范圍（%）
1:02	100.7	98.2-102.1
1:04	99.7	97.7-101.5
1:08	99.5	97.5-101.7
1:16	101.0	99.4-102.2

 

細胞培養(yǎng)上清稀釋比例	平均期望值(%)	范圍（%）
1:02	95.5	84.2-101.6
1:04	93.9	84.2-103.0
1:08	94.6	83.1-104.6
1:16	88.3	76.7-95.6

6.樣本值

應用本試劑盒，檢測若干健康志愿者的樣本，志愿者的用藥史不詳。

樣本類型	樣本數(shù)目	平均值（pg/mL）	樣本值（pg/mL）
血清	10	468.2	49.0-1148.0
肝素血漿	10	511.4	4.0-1101.8
EDTA血漿	10	420.5	38.4-922.3
枸櫞酸鈉血漿	10	974.6	73.6-4302.8
細胞培養(yǎng)上清	10	n.d.	n.d.

n.d. 指樣本濃度值低于檢測范圍內(nèi)的31.25 pg/mL。

7.測定特異性

本試劑盒識別天然和重組人基質(zhì)金屬蛋白酶9。下述因子進行了特異性的評估，沒有觀察到明顯的交叉反應和干擾影響。

Recombinant human:		Recombinant mouse:
ADAM8	MMP-8	ADAM9
ADAM10	MMP-10	ADAM10
ADAM15	MMP-12 (catalytic domain)	ADAM15
Lipocalin-2/NGAL	MMP-13	Lipocalin-2/NGAL
MMP-1	TACE (ADAM17)	MMP-2
MMP-2	TIMP-2	MMP-3
MMP-3	TIMP-3	MMP-9
MMP-7	TIMP-4	TIMP-1