產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
伴刀豆球蛋白A磁珠是表面共價偶聯(lián)了伴刀豆球蛋白 A（ConA）的超順磁性聚合物微球，具有單分散和磁反應(yīng)性強等特點。ConA磁珠在Ca2+和Mg2+存在的情況下，通過伴刀豆球蛋白 A與末端α-D-甘露糖基和α-D-葡萄糖基的親和作用，快速高效地分離純化多糖、糖蛋白和糖脂等生物分子，而且使用ConA磁珠分離或固定細(xì)胞非常便捷，并在后續(xù)清洗過程中最大程度減少細(xì)胞丟失，也可以用于收集和固定細(xì)胞核，也可以直接用于CUT & Run和CUT & Tag（ChIP-seq實驗的革新性技術(shù)）等實驗。
產(chǎn)品性質(zhì)
|
基質(zhì) |
磁性聚合物微球 |
|
配體 |
伴刀豆球蛋白 A（Con A） |
|
載量 |
105個細(xì)胞/μL磁珠 |
|
粒徑 |
1 μm |
|
磁珠濃度 |
10 mg/mL |
|
應(yīng)用 |
分離細(xì)胞/細(xì)胞核，純化糖蛋白，Cut-Run, Cut-Tag |
|
儲存緩沖液 |
PBS (pH7.4), 0.01% Tween-20, 0.05% Proclin-300 |
儲存條件
2~8℃保存，有效期2年。
使用說明
以捕獲細(xì)胞和純化糖蛋白為例，用于Cut-Tag具體操作見12598ES試劑盒。
- 緩沖液配置
1）自備試劑
|
試劑名稱 |
組分 |
|
結(jié)合液 |
20 mM HEPES (pH7.5), 10 mM KCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MnCl2 |
|
清洗液 |
20 mM HEPES (pH7.5), 150 mM NaCl, 0.5 mM Spermidine, 1×Protease inhibitors cocktail |
|
洗脫液 |
5mM Tris (pH8.0), 150 mM NaCl, 1M Glucose |
2）自備設(shè)備和耗材：磁性分離架，旋轉(zhuǎn)混合儀，PCR管，微量移液器及吸頭（RNase-free）。
3）將磁珠恢復(fù)至室溫，且均勻重懸。
- 樣品準(zhǔn)備（以哺乳動物細(xì)胞為例）
1）準(zhǔn)備哺乳動物細(xì)胞(1.0×104~1.0×105個)，離心收集(4℃，600×g，3~5min)，小心吸棄上清；
???????2）加入 140 μL 結(jié)合緩沖液 ，充分混勻重懸細(xì)胞，離心收集(4℃，600×g，3~5min)，小心吸棄上清；
???????3）加入 90 μL 結(jié)合緩沖液，充分混勻重懸細(xì)胞。
【注】：貼壁較緊的細(xì)胞可使用胰蛋白酶等部分消化獲得，對于動物組織、植物或真菌細(xì)胞可通過特殊處理獲得分散的細(xì)胞或原生質(zhì)體進(jìn)行實驗。
- 磁珠準(zhǔn)備
???????1）吸取10 μL均勻重懸的 Con A磁珠，加入40 μL 磁珠結(jié)合液，吹吸混合，磁吸棄上清。
???????2）加入10 μL 磁珠結(jié)合液，吹吸混合。
- 細(xì)胞捕獲
???????1）將重懸在結(jié)合液中的ConA磁珠（步驟3）輕輕滴加在細(xì)胞懸液（步驟2）中，顛倒5次混勻后，置于旋轉(zhuǎn)儀上混勻，室溫孵育30 min 或者4 ℃過夜。
???????2）離心管在磁力架上放置1 min，吸棄上清。
???????3）取500ul清洗液加入磁珠中，用移液器輕柔吹打，重懸磁珠，再置于磁力架1 min，吸棄上清。
???????4）重復(fù)步驟3）洗滌3-4次。
- 洗脫
???????1）糖蛋白的洗脫：加入50~250 μL洗脫液，置于翻轉(zhuǎn)混合儀上室溫孵育10~30 min，接著在磁力架上靜置 1 min，收集上清得到糖蛋白，可用于SDS-PAGE電泳或Western檢測
【注】：也可使用PNGase F酶切除糖基進(jìn)行洗脫。
??????????????2）細(xì)胞的洗脫：磁珠粒徑小，對細(xì)胞的生長和活性影響較小，也可以選擇不洗脫。
注意事項???????
1. 磁珠應(yīng)避冷凍，否則可能會導(dǎo)致磁珠碎裂，性能下降。
2. 磁珠取用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，且充分混勻；但不要劇烈震蕩，否則容易產(chǎn)生氣泡。
3. 建議樣本細(xì)胞活性不低于80% (細(xì)胞活性可以用臺盼藍(lán)染色來鑒定)。
4. ConA在Ca2+和Mn2+離子存在時才有活性，實驗中應(yīng)用的溶液不能含有EDTA等螯合劑，否則會導(dǎo)致結(jié)合效率降低。
5. 水平旋轉(zhuǎn)時定時輕彈底部混勻，細(xì)胞量較多時易聚集干結(jié)。
6. 槍頭吸吹時要緩慢，避免產(chǎn)生過多氣泡；避免用10 μL小槍頭吹吸細(xì)胞；
7. 吸除管內(nèi)液體時，槍頭遠(yuǎn)離磁珠一端，避免槍頭粘連帶出磁珠。
8. 針對特定細(xì)胞類型和細(xì)胞量，可能需要增減磁珠用量以達(dá)到最優(yōu)效果。
9. 本產(chǎn)品僅作科研用途！
10. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
Ver.CN20230601
