產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
Hieff NGS® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina®是針對Illumina®高通量測序平臺開發(fā)的雙鏈DNA甲基化建庫試劑盒。本試劑盒通過連接相應(yīng)的甲基化接頭，經(jīng)亞硫酸氫鹽或酶法轉(zhuǎn)化處理，再經(jīng)過一步擴增即可構(gòu)建針對Illumina®平臺測序的甲基化文庫。試劑盒所有組分均通過質(zhì)量控制和功能驗證，以確保文庫的穩(wěn)定產(chǎn)出，支持多種類型DNA樣本，包括gDNA、cfDNA和FFPE等。本試劑盒推薦的樣本起始量為10 ng-1000 ng DNA，并兼容市面主流的轉(zhuǎn)化方案。
組分信息
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組分編號 |
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組分名稱 |
12214ES08 |
12214ES24 |
12214ES96 |
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12214-A |
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Endprep Buffer |
56 μL |
168 μL |
672 μL |
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12214-B |
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Endprep Enzyme |
24 μL |
72 μL |
288 μL |
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12214-C |
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Ligation Enhancer |
240 μL |
720 μL |
3×960 μL |
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12214-D |
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Rapid T4 DNA Ligase |
80 μL |
240 μL |
960 μL |
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12214-E |
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Methyl Stubby Adapter |
40 μL |
120 μL |
480 μL |
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12214-F |
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2 × Canace® Uracil + PCR Mix 2.0 |
200 μL |
600 μL |
2×1200 μL |
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用方法
一、自備材料
- 純化磁珠：Cat#12601，Hieff NGS® DNA Selection Beads或Cat#A63880，AMPure XP Beads或其他等效產(chǎn)品。
- 轉(zhuǎn)化模塊：Cat#12222，Hieff® DNA Bisulfite Conversion Kit；Cat#12223，Hieff® Mag DNA Methylation Bisulfite Kit和酶轉(zhuǎn)化模塊Cat#12213，Hieff® DNA Mild methyl- Conversion Kit或其他等效產(chǎn)品。
- DNA質(zhì)控：Agilent Technologies 2100 Bioanalyzer或其他等效產(chǎn)品。
- 其他材料：無水乙醇、滅菌超純水、TE Buffer (10 mM Tris-HCl，pH 8.0-8.5+1 mM EDTA)、低吸附EP管、PCR管、磁
力架、PCR儀等。
二、操作流程
圖1 Hieff NGS® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina®
圖2 文庫片段分布示例
注：10 ng cfDNA使用Hieff NGS® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina®建庫后的文庫片段分布 (Agilent 2100,DNA 1000 Kit)，其中紅色代表酶轉(zhuǎn)化方案構(gòu)建的DNA文庫，PCR擴增循環(huán)數(shù)為10；藍(lán)色代表重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化方案構(gòu)建的DNA文庫，PCR 擴增循環(huán)數(shù)為 12。
