神經(jīng)營養(yǎng)素-3（NT-3）是神經(jīng)營養(yǎng)因子NGF家族的一員，其是中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周神經(jīng)系統(tǒng)中特定神經(jīng)元亞群分化和存活所必需的。NT-3 cDNA編碼257個氨基酸殘基的前體蛋白，該前體蛋白具有信號肽和前蛋白，其被切割以產(chǎn)生119個氨基酸殘基的成熟NT-3。成熟NT-3的氨基酸序列在人、小鼠和大鼠中是相同的。神經(jīng)營養(yǎng)因子家族由至少四種蛋白質(zhì)組成，包括NGF、BDNF、NT-3和NT-4/5。這些分泌的細胞因子被合成為前肽，其被蛋白水解處理以產(chǎn)生成熟蛋白。所有神經(jīng)營養(yǎng)因子都有六個保守的半胱氨酸殘基，它們參與三個二硫鍵的形成，并且在氨基酸水平上都具有大約55%的序列同一性。與NGF類似，具生物活性的NT-3預測可能為非共價連接的同源二聚體。

翌圣Human NT-3 ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，用于定量測定人血清、血漿和細胞培養(yǎng)上清中的神經(jīng)營養(yǎng)素-3(Human NT-3)。特異性抗神經(jīng)營養(yǎng)素-3抗體預包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本，經(jīng)過孵育，樣本中存在的神經(jīng)營養(yǎng)素-3與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入檢測抗體（生物素標記）孵育結(jié)合，經(jīng)洗滌，再加入酶結(jié)合物(HRP標記鏈霉親和素)孵育結(jié)合。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應的深淺與樣本中神經(jīng)營養(yǎng)素-3的濃度成正比。加入終止液終止反應，在450 nm 主波長，630nm次波長測定吸光度值。

 

產(chǎn)品信息

貨號	97067ES48 / 97067ES96
規(guī)格	48 T / 96 T
檢測范圍	31.25-2000 pg/mL
檢測方法	雙抗夾心法
檢測物種	人
檢測時長	4小時30分鐘
靈敏度	22.17 pg/mL
稀釋線性	80.9-122.4%
回收率	83.2-119.2%
板內(nèi)差	5.3%
板間差	6.7%

 

實驗數(shù)據(jù)

1. 標曲數(shù)據(jù)

濃度（pg/mL）	顯色值			平均值	校準值
2000		2.979	2.912	2.945	2.949
1000		2.089	2.020	2.054	2.042
500		1.196	1.061	1.129	1.146
250		0.589	0.543	0.566	0.562
125		0.306	0.264	0.285	0.278
62.5		0.168	0.171	0.169	0.158
31.25		0.112	0.107	0.109	0.111
0		0.072	0.071	0.071	/

數(shù)據(jù)擬合繪制標準曲線，生成的標曲用于實驗數(shù)據(jù)分析。

標準曲線圖

 

2. 靈敏度檢測

神經(jīng)營養(yǎng)素-3的最低檢測限為22.17 pg/mL，通過使用重復檢測20次零孔OD值的均值與標準差計算得出。

3. 精密度檢測

酶標板內(nèi)精密度

3個已知濃度的樣本酶標板內(nèi)重復測定8次，評估酶標板內(nèi)的精密度。

酶標板間精密度

3個已知濃度的樣本酶標板間重復檢測30次，評估酶標板間的精密度。

項目	板內(nèi)精密度			板間精密度
樣本	1	2	3	1	2	3
	8	8	8	30	30	30
平均值	1004.10	218.79	58.04	1022.16	219.94	56.91
標準差	63.09	5.44	4.10	74.29	9.05	4.91
變異系數(shù)（%）	6.28	2.49	7.07	7.27	4.12	8.63

4. 回收率檢測

  通過不同水平的神經(jīng)營養(yǎng)素-3添加于樣本中來測定回收率，其回收率如下:

樣本類型	平均回收率(%)	范圍（%）
血清	107.6	95.5-118.7
血漿	107.2	83.2-119.2
細胞培養(yǎng)上清	107.1	92.7-117.2

5. 稀釋線性檢測

血清稀釋比例	平均期望值(%)	范圍（%）
1:02	113.8	107.9-122.4
1:04	112.1	110.2-114.0
1:08	105.6	96.1-118.1
1:16	94.6	82.6-105.4

 

血漿稀釋比例	平均期望值(%)	范圍（%）
1:02	107.8	104.2-111.4
1:04	110.5	103.6-116.7
1:08	112.9	110.5-115.5
1:16	85.3	82.4-88.4

 

細胞培養(yǎng)上清稀釋比例	平均期望值(%)	范圍（%）
1:02	96.7	95.9-97.5
1:04	89.6	80.9-96.7
1:08	100.0	95.6-108.9
1:16	87.8	82.3-95.1

6. 樣本值

應用本試劑盒，檢測若干樣本，背景不詳。

樣本類型	樣本數(shù)目	平均值（pg/mL）	樣本值（pg/mL）
細胞培養(yǎng)上清	4	n.d.	n.d.
血清	10	n.d.	n.d.
血漿	8	n.d.	n.d.

n.d. 指樣本濃度值低于檢測范圍內(nèi)的31.25 pg/mL  

7. 測定特異性

本試劑盒識別天然和重組人神經(jīng)營養(yǎng)素-3。下述因子進行了特異性的評估，沒有觀察到明顯的交叉反應和干擾影響。

Recombinant Human:

β-NGF

BDNF

CNTF

GDNF

NT-4