腫瘤壞死因子α（TNF-α），也稱為惡病質(zhì)素，又名TNFSF1A，是一種多效細(xì)胞因子，在炎癥、細(xì)胞凋亡和免疫系統(tǒng)發(fā)育中起核心作用，可由多種免疫細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生。TNF-α受體主要是TNFR1和TNFR2，其信號可以激活caspase 8、轉(zhuǎn)錄因子NF-κB和激酶JNK等。人TNF-α的氨基酸組成與小鼠TNF-α有79%的同源性，TNF-α的生物學(xué)功能似乎沒有明顯的種屬特異性。研究表明TNF-α一方面對某些類型的感染具有抵抗力，另一方面又引起炎癥，在病理過程中起著矛盾的作用。TNF-α也可能影響葡萄糖攝取與胰島素抵抗密切相關(guān)。同時TNF-α在腫瘤增殖、遷移、侵襲和血管生成中也起著關(guān)鍵作用。

翌圣Human TNF-α ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，用于定量測定血清、血漿中的人腫瘤壞死因子α(Human TNF-α)。特異性抗人腫瘤壞死因子α抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本，經(jīng)過孵育，樣本中存在的人腫瘤壞死因子α與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入檢測抗體孵育結(jié)合，經(jīng)洗滌，再加入酶結(jié)合物(Streptavidin-HRP)孵育結(jié)合。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中人腫瘤壞死因子α的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng)，在450 nm 波長(參考波長570 - 630 nm)測定吸光度值。

 

產(chǎn)品信息

貨號	97072ES48 / 97072ES96
規(guī)格	48 T / 96 T
檢測范圍	15.63-1000 pg/mL
檢測方法	雙抗夾心法
檢測物種	人
檢測時長	4.5小時
靈敏度	5.06 pg/mL
稀釋線性	82 - 118%
回收率	78 - 112%
板內(nèi)差	3.5%
板間差	5.3%

 

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

1. 標(biāo)曲數(shù)據(jù)

數(shù)據(jù)擬合繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，生成的標(biāo)曲用于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析。

標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

濃度（pg/mL）	顯色值		平均值	校準(zhǔn)值
1000	2.396	2.308	2.352	2.353
500	1.419	1.469	1.444	1.437
250	0.780	0.825	0.803	0.814
125	0.426	0.466	0.446	0.443
62.5	0.237	0.252	0.245	0.241
31.25	0.134	0.139	0.136	0.134
15.625	0.078	0.084	0.081	0.080
0	0.022	0.021	0.021	/

2. 靈敏度檢測

TNF-α的最低檢測限為5.06 pg/mL，通過使用重復(fù)檢測20次零孔OD值的均值與標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算得出。

3. 精密度檢測

酶標(biāo)板內(nèi)精密度

3個已知濃度的樣本酶標(biāo)板內(nèi)重復(fù)測定10次，評估酶標(biāo)板內(nèi)的精密度。

酶標(biāo)板間精密度

3個已知濃度的樣本酶標(biāo)板間重復(fù)檢測30次，評估酶標(biāo)板間的精密度。

項(xiàng)目	板內(nèi)精密度			板間精密度
樣本	1	2	3	1	2	3
	6	6	6	23	23	23
平均值	464.24	134.10	33.06	482.84	130.37	33.90
標(biāo)準(zhǔn)差	12.57	7.12	0.79	26.08	7.86	1.56
變異系數(shù)（%）	2.7	5.3	2.4	5.4	6.0	4.6

4. 回收率檢測

 通過不同水平的TNF-α添加于樣本中來測定回收率，其回收率如下:

樣本類型	平均回收率(%)	范圍（%）
血清	102.9	90.5-112.5
血漿	90.4	78.5-100.4
血漿細(xì)胞培養(yǎng)上清	95.3	88.9-100.2

5. 稀釋線性檢測

血清稀釋比例	平均期望值(%)	范圍（%）
1:02	98.5	94.2-101.8
1:04	95.1	93.3-96.4
1:08	99.1	93.8-102.5
1:16	101.3	91.2-106.5

 

血漿稀釋比例	平均期望值(%)	范圍（%）
1:02	96.7	85.7-103.6
1:04	94.8	84.7-106.8
1:08	99.7	86.1-116.9
1:16	95.9	81.7-118.0

 

細(xì)胞培養(yǎng)上清稀釋比例	平均期望值(%)	范圍（%）
1:02	95.1	92.7-96.3
1:04	97.7	96.2-99.0
1:08	102.5	101.7-103.8
1:16	101.6	97.8-104.5

6. 樣本值

應(yīng)用本試劑盒，檢測若干健康志愿者的樣本，志愿者的用藥史不詳。

樣本類型	樣本數(shù)目	平均值（pg/mL）	樣本值（pg/mL）
血清	10	n.d.	n.d.
血漿	6	n.d.	n.d.
細(xì)胞培養(yǎng)上清	4	n.d.	n.d.

n.d. 指樣本濃度值低于檢測范圍內(nèi)得15.63 pg/mL

7. 測定特異性

本試劑盒識別天然和重組人腫瘤壞死因子α。下述因子進(jìn)行了特異性的評估，沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)和干擾影響。

Recombinant human:		Recombinant Mouse:
IL-1α	IL-10	IL-1α	IL-10
IL-1β	IL-12	IL-1β	IFN-γ
IL-2	IFN-γ	IL-2	TNF-α
IL-4	LIF	IL-4	VEGF
IL-5	RANKL	IL-5	RANKL
IL-6	TRAIL	IL-6	TRAIL
IL-8