產品簡介

Indo-1是一種細胞生物學常用的鈣離子熒光探針，與Fura-2為目前使用最廣泛的比率法測定的鈣熒光指示劑，Indo-1能特異性地結合Ca²⁺，同時可發(fā)出熒光，結合 Ca²⁺后的最大發(fā)射波長從結合前的475 nm向400 nm（Ca2+飽和時）偏移，該信號變化可被流式細胞儀較好的捕捉：在氬離子激光器的351-364光譜范圍內單一波長激發(fā)該探針，在400 nm 和475 nm 的波長處分別檢測結合鈣離子和未結合鈣離子的熒光信號，通過二者熒光強度的比率測定鈣離子濃度。由于Indo-1是極性大的酸性化合物，無法進入細胞內，為此在其負性基團上結合乙酰氧甲酯，使其成為Indo-1/AM，該變化既增加了酯溶性又消除了負電荷，極大的提高了細胞滲透性。在細胞內，Indo-1/AM被酯酶水解成Indo-1后可與胞漿游離Ca²⁺可逆性結合。

組分信息

產品性質

儲存條件

室溫運輸。-20℃避光干燥保存，可保存1年。

使用說明

1. Indo-1/AM儲存液的配制

利用高質量無水DMSO溶解Indo-1/AM配制成2 - 5 mM的儲存液，該儲存液可分裝于-20℃避光干燥密封保存，最長可保存6個月，但是避免反復凍融，建議分裝保存。每次使用前需回溫至室溫。

2. Indo-1/AM工作液的配制

利用合適緩沖液（如HHBS）將Indo-1/AM稀釋成2 - 20 μM的工作液，并添加0.04% Pluronic F-127和有機陰離子轉運抑制劑probenecid（0.5 - 1 mM）。

注：① 對于大多數細胞系，建議最終濃度為4 - 5 μM的Indo-1/AM。細胞加載所需的指示劑的確切濃度必須根據經驗確定。

② Indo-1/AM工作液需現配現用，避免反復凍存。

③ Pluronic F-127 可以防止Indo-1/AM在緩沖液中聚合并能幫助其進入細胞。

3. 取出預培養(yǎng)的細胞，除去培養(yǎng)基，使用緩沖液洗滌細胞3次。

注：如果使用含血清的培養(yǎng)基，血清中的酯酶會降低Indo-1/AM進入細胞的效果。另外含有酚紅的培養(yǎng)基會使本底值略微偏高，所以加工作液之前需盡量去除培養(yǎng)基殘留。

4. 將 Indo-1/AM工作液加入細胞，加入量以覆蓋細胞為準。在37℃培養(yǎng)30 - 60 min。
5. 用緩沖液（如HHBS）洗滌細胞 3 次，以充分去除殘留的Indo-1/AM工作液。然后加入緩沖液覆蓋細胞。
6. 數字成像顯微鏡檢測細胞。

注：某些細胞具有自體熒光會影響結果分析，需使用未加載探針細胞做對照，在結果分析時在同一波長下扣除自熒光。

注意事項

1. 本產品僅作科研用途。

2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

3. 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

4. 乙酰氧基甲基酯（Acetoxymethylester，AM）容易吸潮，從冰箱取出后，請確認在干燥的環(huán)境放至室溫后再開封。由于試劑極其微量，開封前請將其短暫離心，以保證粉末落入管底

5. 第一次使用時，建議母液現配現用。且溶解后的試劑盡可能在短時間內使用，以保證實驗效果。

6. 母液遇水極易分解，若單次不能用完，建議分裝保存，例如5μL/管，用封口膜封口，并嚴格做到≤-20℃密封干燥保存。

7. 建議您在正式實驗前先摸索一下細胞量、鈣離子熒光探針的終濃度、培養(yǎng)時間等，找到最佳實驗條件。

Ver.CN20241124