Rhod-2,AM,Cell Permeable 細(xì)胞可滲透鈣離子熒光探針
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已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Rhod-2是一種可見光激發(fā)的高親和力Ca2+指示劑，與其他可見光激發(fā)熒光探針如Fluo-3/4相比，Rhod-2具有長(zhǎng)波長(zhǎng)，更適用于檢測(cè)具有較高自熒光現(xiàn)象的細(xì)胞和組織內(nèi)鈣離子水平以及檢測(cè)由光感受器和籠鎖鈣離子螯合劑光激活導(dǎo)致的鈣離子釋放。
與紫外光激發(fā)的熒光探針相比，如Fura-2和Rhod-2，可見光激發(fā)Ca2+探針具有以下特點(diǎn)：1）可被大多數(shù)設(shè)備的激發(fā)器有效激發(fā)，包括共聚焦激發(fā)掃描顯微鏡以及流式細(xì)胞儀等。2）具有更強(qiáng)的染料吸收性能，使得更低濃度的探針即可成功檢測(cè) Ca2+變化，從而降低了對(duì)活細(xì)胞的光毒性。3）Ca2+依賴性熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，對(duì)Ca2+變化水平檢測(cè)敏感度更高。4）降低樣品自熒光以及光散射的干擾。5）兼容光激活探針以及UV-激發(fā)試劑，因此更方便于多參數(shù)檢測(cè)。6）無(wú)光譜偏移。7）長(zhǎng)波長(zhǎng)鈣離子探針，能夠與GFP和綠色熒光探針兼容。8）特別定位在線粒體，以羅丹明結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的Rhod-2, AM帶正電荷，以電位驅(qū)動(dòng)的方式吸收聚集在線粒體，熒光顯微鏡下觀察進(jìn)入細(xì)胞呈現(xiàn)點(diǎn)狀染色模式。
組分信息
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組分名稱 |
40776ES50 |
40776ES72 |
40776ES80 |
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Rhod-2, AM, Cell Permeant 細(xì)胞可滲透鈣離子熒光探針 |
50 μg |
5×50 μg |
20×50 μg |
產(chǎn)品性質(zhì)
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CAS 號(hào)（CAS NO.） |
129787-64-0 |
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分子式（Molecular Fomular） |
C52H59N4O19Br |
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分子量（Molecular Weight） |
1123.9575 |
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Ex/Em（nm, Ca2+-bound） |
549/578 |
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結(jié)構(gòu)式（Structure） |
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儲(chǔ)存條件
室溫運(yùn)輸。-20℃避光干燥保存，可保存1年。
使用說明
- Rhod-2/AM儲(chǔ)存液的配制
利用高質(zhì)量無(wú)水DMSO溶解Rhod-2/AM配制成2 - 5 mM的儲(chǔ)存液，該儲(chǔ)存液可分裝于-20℃避光干燥密封保存，最長(zhǎng)可保存6個(gè)月，但是避免反復(fù)凍融，建議分裝保存。每次使用前需回溫至室溫。
- Rhod-2/AM工作液的配制
利用合適緩沖液（如HHBS）將Rhod-2/AM稀釋成2 - 20 μM的工作液，并添加0.04% Pluronic F-127和有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑probenecid（0.5 - 1 mM）。
注：① 對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞系，建議最終濃度為4 - 5 μM的Rhod-2/AM。細(xì)胞加載所需的指示劑的確切濃度必須根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。
② Rhod-2/AM工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免反復(fù)凍存。
③ Pluronic F-127 可以防止Rhod-2/AM在緩沖液中聚合并能幫助其進(jìn)入細(xì)胞。
- 取出預(yù)培養(yǎng)的細(xì)胞，除去培養(yǎng)基，使用緩沖液洗滌細(xì)胞3次。
注：如果使用含血清的培養(yǎng)基，血清中的酯酶會(huì)降低Rhod-2/AM進(jìn)入細(xì)胞的效果。另外含有酚紅的培養(yǎng)基會(huì)使本底值略微偏高，所以加工作液之前需盡量去除培養(yǎng)基殘留。
- 將 Rhod-2/AM工作液加入細(xì)胞，加入量以覆蓋細(xì)胞為準(zhǔn)。在37℃培養(yǎng)30 - 60 min。
- 用緩沖液（如HHBS）洗滌細(xì)胞 3 次，以充分去除殘留的Rhod-2/AM工作液。然后加入緩沖液覆蓋細(xì)胞。
- 數(shù)字成像顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞。
注：某些細(xì)胞具有自體熒光會(huì)影響結(jié)果分析，需使用未加載探針細(xì)胞做對(duì)照，在結(jié)果分析時(shí)在同一波長(zhǎng)下扣除自熒光。
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
3. 熒光染料均存在淬滅問題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
4. 乙酰氧基甲基酯（Acetoxymethylester，AM）容易吸潮，從冰箱取出后，請(qǐng)確認(rèn)在干燥的環(huán)境放至室溫后再開封。由于試劑極其微量，開封前請(qǐng)將其短暫離心，以保證粉末落入管底
5. 第一次使用時(shí)，建議母液現(xiàn)配現(xiàn)用。且溶解后的試劑盡可能在短時(shí)間內(nèi)使用，以保證實(shí)驗(yàn)效果。
6. 母液遇水極易分解，若單次不能用完，建議分裝保存，例如5μL/管，用封口膜封口，并嚴(yán)格做到≤-20℃密封干燥保存。
7. 建議您在正式實(shí)驗(yàn)前先摸索一下細(xì)胞量、鈣離子熒光探針的終濃度、培養(yǎng)時(shí)間等，找到最佳實(shí)驗(yàn)條件。
Ver.CN20241124
