產(chǎn)品信息
 

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品編號(hào)	規(guī)格	儲(chǔ)存	價(jià)格（元）
IgG MagBeads, Goat anti-Mouse 山羊抗小鼠IgG免疫磁珠	47502ES03	1 mL	2-8℃保存	728.00

產(chǎn)品描述
 

免疫磁珠分離技術(shù)是以高均一性的磁性微球?yàn)楣滔嘀С治?，將免疫配基通過功能基團(tuán)結(jié)合到磁性載體上形成的免疫磁性微球，利用免疫學(xué)反應(yīng)的高度特異性與磁珠特有的磁響應(yīng)性，實(shí)現(xiàn)特異性靶物質(zhì)分離的技術(shù)，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、效率高、操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn)。

應(yīng)用羊抗鼠（Goat anti-Mouse）IgG免疫磁珠可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇各種小鼠單抗實(shí)現(xiàn)細(xì)胞分離。通常使用以下兩種分離方式：陽性分離或陰性分離。陽性分離是直接從細(xì)胞混合液中分離靶細(xì)胞，陰性分離是利用免疫磁珠去除無關(guān)細(xì)胞，收集游離于磁場(chǎng)中的靶細(xì)胞。

羊抗鼠（Goat anti-Mouse）IgG免疫磁珠可通過直接法或間接法實(shí)現(xiàn)細(xì)胞分選。直接法是將抗特異細(xì)胞表面抗原的Mouse IgG與免疫磁珠表面的羊抗鼠IgG結(jié)合，將磁珠結(jié)合的細(xì)胞與其它細(xì)胞分開，達(dá)到細(xì)胞分選的目的。間接法是先將抗特異細(xì)胞表面抗原的Mouse IgG與混合體系中靶細(xì)胞表面特異抗原結(jié)合，再與羊抗鼠（Goat anti-Mouse）IgG免疫磁珠結(jié)合達(dá)到細(xì)胞分選的目的。

產(chǎn)品性質(zhì)
 

磁珠含量（Beads Concentration）	6 mg/mL
平均粒徑（Mean Diameter）	1.0±5% µm
結(jié)合能力（Binding Capacity）	0.20 mg Ms IgG/mg

運(yùn)輸和保存方法
 

冰袋運(yùn)輸。2-8℃保存。有效期6個(gè)月。

注意事項(xiàng)
 

1）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2）請(qǐng)勿凍存、干燥、加熱或離心操作，這些操作會(huì)導(dǎo)致磁珠聚集而降低結(jié)合能力。

3）產(chǎn)品使用前需劇烈振蕩或超聲處理，避免磁珠沉降聚集。

4）磁珠分選緩沖液，推薦使用 PBS，0.5% BSA，2 mM EDTA，0.09%NaN3，pH7.4。
5）Fc受體（FcR）封閉：在某些實(shí)驗(yàn)中，部分抗體會(huì)通過其Fc段與不同細(xì)胞表面的FcR結(jié)合，出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。此時(shí)可預(yù)先將細(xì)胞與IgG或針對(duì)FcR的特異性抗體室溫孵育5-10 min，一般107細(xì)胞中可加入1-10 µg IgG或FcR的特異性抗體進(jìn)行封閉；反應(yīng)體系中也可加入5-10%蛋白降低非特異性反應(yīng)，但蛋白濃度太高會(huì)降低分選效率。

6）實(shí)驗(yàn)前應(yīng)對(duì)抗體使用濃度，磁珠與細(xì)胞反應(yīng)比例，反應(yīng)時(shí)間等參數(shù)優(yōu)化以達(dá)到最佳的細(xì)胞分選效果。
7）如果分選的細(xì)胞進(jìn)一步用作細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，全過程注意無菌操作，分選緩沖液中可不加防腐劑NaN3，磁珠保存液中的防腐劑可用適量無菌緩沖液或細(xì)胞培養(yǎng)基洗2次以去除。
8）本產(chǎn)品僅作科研用途！

使用方法
 

以下為常規(guī)操作方式，建議根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方法。
1）從抗凝血中提取外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），用PBS，5% BSA，0.09% NaN3，pH7.4洗3次，40-70 µm尼龍網(wǎng)過濾去除細(xì)胞團(tuán)塊和碎片，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1×108 /mL。

2）加入適量Mouse IgG，一般1×107 PBMC中加入0.1-20 µg抗體，室溫反應(yīng)30 min。

3）1000 rpm離心5 min，棄上清。加入1 mL磁珠分選緩沖液重懸細(xì)胞，1000 rpm離心5 min，棄上清，洗2次（2×1 mL）。
4）1 mL磁珠分選緩沖液重懸細(xì)胞，加入50 µL免疫磁珠，室溫反應(yīng)30 min，間隔10 min輕晃反應(yīng)管，避免磁珠沉淀，使磁珠與細(xì)胞充分反應(yīng)，盡量防止出現(xiàn)氣泡。陰性分選采用步驟5-7，陽性分選采用步驟8-9。

陰性分選步驟

5）應(yīng)用磁分離器分離5-8 min，收集未被免疫磁珠結(jié)合的細(xì)胞懸液至另一干凈管中。

6）加入1 mL磁珠分選緩沖液重懸磁珠，用玻璃滴管或移液槍槍頭反復(fù)吹打磁珠。

7）重復(fù)步驟5，合并兩次收集的細(xì)胞懸液，可將細(xì)胞懸液再次置于磁分離器中分離5-8 min，可明顯增加靶細(xì)胞純度。

陽性分選步驟

8）應(yīng)用磁分離器分離5-8 min，去除未與磁珠結(jié)合的細(xì)胞。
9）結(jié)合了靶細(xì)胞的免疫磁珠用1 mL磁珠分選緩沖液洗5次（5×1 mL）后，可直接進(jìn)行流式檢測(cè)，或置于37℃培養(yǎng)48 hrs可使細(xì)胞與磁珠分離。

HB180108